疑难问题：在选修3中学习了PCR技术，但教学中要求不高，学生总是有疑惑，整理如下。值得说明的是解旋用的是加热，并没有直接加ATP，能量来自于dNTP，需要引物和Mg²⁺ 等。

一、PCR定义

PCR即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。

是一项DNA体外合成放大技术，能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。可用于基因分离克隆，序列分析，基因表达调控，基因多态性研究等许多方面。

二、PCR技术的基本原理

1、PCR反应成分

（1）模板DNA；（2）引物；（3）四种脱氧核糖核苷三磷酸；（4）DNA聚合酶；（5）反应缓冲液、Mg²⁺ 等。

2、PCR反应基本步骤

（1）变性：通过加热使模板DNA的双链之间的氢键断裂，双链分开而成单链的过程。（94，30s）。

（2）退火：当温度降低时，引物与模板DNA中互补区域结合成杂交分子。（55，30s）。

（3）延伸：在DNA聚合酶、dNTP（（脱氧核糖核苷三磷酸）的缩写，包括dATP, dGTP, dTTP, dCTP,等在内的统称，N是指含氮碱基，代表变量指代A、T、G、C、U等中的一种。）、 Mg²⁺ 存在下（据资料是DNA聚合酶和dNTP的激活剂），DNA聚合酶催化引物（一小段寡聚脱氧核苷酸链，在体内是寡聚核糖核苷酸链）按5’→3’方向延伸，合成出与模板DNA链互补的DNA子链。（70～72，30～60s）

以上述三个步骤为一个循环，每一循环的产物均可作为下一个循环的模板，经过n次循环后，目的DNA以2ⁿ的形式增加。