一、是否需要解旋酶？

DNA解旋酶能降低DNA双链解成单链的活化能，在解旋酶的催化作用下，由ATP提供能量,在生物体内的温和条件下就能使DNA的双链解成单链。在没有酶的催化作用下，就必须由外界提供更多的能量才能使DNA分子活化，当在体外加热到90℃—95 ℃，DNA分子就由常态转化为活跃状态，双链则解成单链。所以PCR技术不需要解旋酶。

二、PCR技术加入的原料是dNTP（脱氧核苷酸三磷酸）,为什么不是四种脱氧核苷酸？

在细胞内，DNA的复制需要四种脱氧核糖核苷酸作为原料，而PCR技术扩增目的基因需要的原料却是dNTP（dATP、dGTP、dCTP、dTTP）（脱氧核苷酸三磷酸）。实际上，在PCR技术中，DNA复制时直接参与合成DNA的是四种脱氧核苷酸三磷酸（dATP、dGTP、dCTP、dTTP），在 DNA聚合酶催化作用下，引物或者已合成的DNA链的3’—羟基对进入的脱氧核苷酸三磷酸α—磷原子发生亲核攻击，从而形成3’，5’—磷酸二酯键并脱下焦磷酸（PPi），形成磷酸二酯键所需要的能量来自α—与β—磷酸基之间高能磷酸键的裂解。而在生物体内脱氧核苷酸在磷酸激酶的催化下接受 ATP提供的磷酸基，逐步转化为脱氧核苷酸二磷酸、脱氧核苷酸三磷酸后再参与DNA的合成。所以二者并不矛盾，用dNTP作原料在体外利用PCR技术扩增目基因简化了操作过程。

三、引物用DNA片段还是RNA片段？

在细胞内，DNA复制时的引物是DNA转录形成的RNA片段。而在PCR技术中，可以使用人工合成的单链DNA片段作为引物比较方便。