加载中…pET28a载体图谱和多克隆位点详细信息
(2010-11-10 19:26:41)
标签：
pet28a载体价格750元 |
分类： pet28a |
Plasmid Name: pET-28 a (+)
Alt Names: pET28a
Source/Vendor: EMD Biosciences
Plasmid Type: Bacterial
Viral/Non-viral: Nonviral
Stable/Transient: Transient
Constitutive/Inducible: Constitutive
Expression Level: High
Plasmid Size: 5369
Sequencing Primer: T7 Fwd
Sequencing Primer: Sequence 5'd[TAATACGACTCACTATAGGG]3'
Protein Tags: His (Nterm and Cterm)
Bacterial Resistance: Kanamycin
Notes: Nterm thrombin cleavage site; a,b,c vary by MCS;
Catalog Number: 69864-3
Vector Map:
http://s14/middle/6de86a16g94b1a5ca365d&690
pet28a载体价格750元，pet28a载体图谱请见上方。实验室现有JM109，DH5a,B21(DE3),TOP10等4种感受态细胞。按理说最好是用B21（DE3），但是其转化效果最差。推测酶切和连接都没有问题但就是长不出克隆。转化空载时用1ul的载体转100ul感受态可以长出50个左右的克隆。但连接产物就是不行。
想请教诸位的是，其他的几种感受态有哪一种可以比较近似地替代B21（DE3)？
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作者：wolfebst
BL21是表达宿主,所以最好用这个
其他的都是用来克隆的 作者：pinene3862 通常我们是连接后转DH5a这些菌株的感受态细胞，然后鉴定提质粒。用提取的质粒转BL21，做细菌表达。
这样效率高很多。 作者：xuehu2008 请教 pinene3862，您用pET28a转过DH5a？效果如何？
作者：shenzhicon
DH5a是克隆用的菌，拿pET28a转应该没问题的。我做过pET22b、pET30a还有pET41a，效果都很好的。pinene3862的方法我们实验室也一直在用，效率很高
作者：wolfebst 我的实验也是先克隆到JM109,然后在亚克隆到BL21的
因为pET载体的拷贝数比较低 不容易直接克隆到表达宿主中 作者：xuehu2008 :):)谢谢wolfebst 。收获不少
作者：meizixijun 我也遇到一样的情况，重组质粒在BL21中怎么都转化不出。谢谢指教，我也回去试试。:o
作者：houjinglhy 基因操作在DH5里面做（酶连物转化）
然后再提质粒，转BL21 一般都这么做比较好 作者：2008207380 我们实验室也在用pET28a 也是先在DH5α里扩增重组质粒 然后在转到DE3中表达的
如果BL21不行的话 lz可以试试Tuner（DE3） 作者：cpu2004
我做实验的时候基本上是直接转化到BL21的，用CaCl2做感受态的时候过夜，5%转接2h，下面一样，感受效率挺高的。当然，我这样做的时候插入序列最长只有1700bp。其它大片段我还是用克隆+亚克隆的方法做的。
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作者：wolfebst
其他的都是用来克隆的
作者：pinene3862
这样效率高很多。
作者：xuehu2008
作者：shenzhicon
作者：wolfebst
因为pET载体的拷贝数比较低
不容易直接克隆到表达宿主中
作者：xuehu2008
作者：meizixijun
作者：houjinglhy
然后再提质粒，转BL21 一般都这么做比较好
作者：2008207380
如果BL21不行的话 lz可以试试Tuner（DE3）
作者：cpu2004
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