在分析Aβ寡聚体对脑皮质神经元的作用时,通过染色发现微管相关蛋白(MAP2)的含量在神经元内持续减少(请见Fig.
2G-I和Fig.
3A-F)。总的来说,对照神经元每个细胞内有4-5个MAP2染色点;而被Aβ寡聚体处理的神经元,当Aβ寡聚体的浓度增加时,MAP2的含量减少,而核内BrdU的合成增加。对这些结果的量化是通过使用ImagePro
Plus™
图像分析软件(材料与方法)中macro(“Dendrites”)功能,检测随机5个区域内树突的数量来实现的。这些数据显示,无论和空白载体还是浓度增加的Aβ单体(Fig.
3G)、Aβ原纤维相比(数据未显示),当Aβ寡聚体的浓度增加时,树突的数量显著减少(Fig.
3H)。这些结果与之前的报道一致,那就是在成熟的海马培养中,
Aβ寡聚体可以使其脊髓的标记分子drebrin减少,也可以改变其脊髓的形态和密度[15]。类似的情况还出现在Aβ寡聚体处理下的7
DIV原代脑皮质神经元培养中(数据未显示)。有趣的是,没有一个Aβ寡聚体处理的实验,即使在最高的浓度下,可以改变MAP2阳性细胞的数量,也不能显著改变神经元细胞数(通过MTT体外细胞死亡检测实验)(数据未显示)。这些结果与之前的数据一致提示:低于纳摩数量级浓度的Aβ寡聚体可诱导突触和树突的减少,但是无显著的神经细胞消减[15,33]。
为了验证MAP2的消减和神经元细胞周期事件的发生是否是由于Aβ寡聚体诱导的,我们分别在Aβ寡聚体2.0μg/ml处理下BrdU阴性和阳性的细胞中量化MAP2的数量和长度。有趣的是,和BrdU阴性神经元相比,在BrdU阳性神经元中,MAP2的数量减少了70%(Fig.
3F和3I)。此外,和BrdU阴性神经元相比,在BrdU阳性神经元中,长度不大于5 μm的MAP2数量减少了60%(Fig.
3F和3J)。综上所述,这些结果证明,MAP2的消减和神经元细胞周期事件的发生有着联系,并且暗示了它们的显型很有可能是脑皮质神经元对Aβ寡聚体的部分生物反应。
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