试题研究：高考和模拟考试试题中经常出现提高重组质粒形成的效率，试题具有开放性，教师也很难把握评分标准。以下就是相关的内容小结。

常规因素：

酶的种类和浓度（酶根据实际情况考虑限制性核酸内切酶、DNA连接酶），温度和pH等条件。

专业因素：

尽量提高载体和DNA片段的纯度，提取或纯化时用水溶解而不用缓冲液溶解，以减少影响成分。

DNA片段与载体的比例接近于一定的比例，如10：1（这个需要实验的经验来控制了，一般都是看电泳图）。

设计合理的限制性酶切位点，建议是设计双酶切位点，尽量不要用同一种酶来切两个相同的位点，这样很容易导致DNA片段反向连接，而且载体自连的可能性很大，重组出来全是空质粒。

自身环化示意图