试题研究：分裂指数是细胞分裂的一个重要指标，在科学研究中有专门的测定方法。高考试题中出现了曲线绘制，要求绘出和细胞数目增长的变化关系。显微镜下统计的细胞数目包括活细胞和死细胞，分裂指数中分裂的细胞只有少数活细胞才有。细胞数目的变化规律是S形的话，分裂指数也会先增后降，因为细胞增长有一个阶段是指数增长期。这解释了高考评分曲线准确的时候的要求，斜率先增加很快，再慢慢降低。

同时，也产生一个疑问，有的资料认为测定和统计的是分裂中期，但看了一些资料并没有规定要测定分裂中期，而是分裂期。

一、分裂指数

体外培养细胞生长、分裂繁殖的能力，可用分裂指数来表示。

它与生长曲线有一定的联系，如随着分裂指数的不断提高，细胞也就进入了指数生长期。

分裂指数指细胞群体中分裂细胞所占的百分比，它是测定细胞周期的一个重要指标，也是不同实验研究选择细胞的重要依据。 

某培养过程中的分裂指数曲线

二、典型试题（高考试题）

试题：为了研究海拉细胞的细胞增殖，以总细胞数和细胞分裂指数（细胞群体中分裂细胞所占的百分比）为测定指标，完善实验思路，预测实验结果并进行分析与讨论。

（要求：细胞培养至培养液中营养物质不足。实验思路涉及的主要用具须写出，但具体操作过程不做要求。实验条件适宜）

回答下列问题：

（1）完善实验思路：

①将己知细胞密度的海拉细胞悬液，用移液管加入到各个含细胞培养液的培养瓶中，然后置于CO₂培养箱中培养。

②__________对所得数据进行统计与处理。

（2）预测实验结果（以坐标曲线图形表示实验结果）： 

（3）分析与讨论

细胞计数时,见到压在方格线上的细胞如何计数？

若要得到大量的G1期细胞,可采用的方法__________，原因是__________。

若为了检测某种药物对该细胞的增殖有促进作用，可在培养液中加入同位素标记的物质是________，原因是__________。

 答案：

（1）每隔一段时间，用血细胞计数板在显微镜下计数并记录，同时制作临时装片，在显微镜下观察与计数分裂相细胞并记录

（2）

（3）

只计左线和上线上的细胞

减少培养液中的营养物质成分

由于原料缺少使细胞合成有关物质如RNA和蛋白质等受阻，而停滞于G1期

胸腺嘧啶脱氧核苷 

胸腺嘧啶脱氧核苷是DNA合成的原料，其进入细胞的量可反映细胞的增殖情况

三、实验过程

1.原理

体外培养细胞生长、分裂繁殖的能力，可用分裂指数来表示。它与生长曲线有一定的联系，如随着分裂指数的不断提高，细胞也就进入了指数生长期。

分裂指数指细胞群体中分裂细胞所占的百分比，它是测定细胞周期的一个重要指标，也是不同实验研究选择细胞的重要依据。

2.仪器、用品与试剂

（1）仪器与用品：CO₂培养箱、普通显微镜、细胞培养血、盖玻片、吸管

（2）试剂：培养液、胰酶、甲醇、冰醋酸、Giemsa染液

3.操作步骤

（1）消化细胞，将细胞悬液接至内含盖玻片的培养皿中。

（2）CO₂培养箱中培养48小时，使细胞长在盖片上。

（3）取出盖片，按下列顺序操作：

磷酸缓冲盐溶液（PBS）漂洗3分钟→甲醇：冰醋酸=3:1固定液中固定30分钟→Giemsa液染色10分钟→自来水冲洗。

（4）盖片晾干后反扣在载玻片上，镜检。

（5）计算：

分裂指数=分裂细胞数/总细胞数×100%

4.注意事项

操作时动作要轻，以免使盖片上的细胞脱落。

附：Giemsa染液配制：

称Giemsa粉末0.5克，加几滴甘油研磨，再加入甘油（使加入的甘油总量为33ml）。56中保温90-120分钟。加入33ml甲醇，置棕色瓶中保存，此为Giemsa原液。

使用时按要求用PBS稀释。一般稀释10倍。