涂布分离法分离的菌落

疑难问题：先看以下试题的菌落计数，发现计算怎么会取后三个数据，舍去13这个数据？而浙科版选修1教材第20页，明确提到每个培养皿最适宜的是20个以内？

 试题：如图是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程。请回答：

（1）图中选择培养基应以                  为唯一氮源；鉴别培养基还需添加

                作指示剂。

（2）在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为10⁵的土壤样品溶液0.1mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为13、156、462、178和191。

该过程采取的接种方法是                ，每克土壤样品中的细菌数量为               个。

解析：（1）脲酶能够催化尿素分解为氨，因此要从土壤中筛选产脲酶的细菌，培养基应以尿素为唯一氮源；由于尿素被脲酶分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，pH升高，从而使酚红指示剂变红，因此鉴别培养基还需添加酚红作指示剂。

（2）用于计数细菌菌落数的常用方法是稀释涂布平板法，统计的菌落数应介于30～300之间（人教版教材），故选择细菌菌落数为156、178和191的平板计数。

每克该土壤样品中的菌落数对应的应该是每毫升菌液中的细菌数目，所以每克该土壤样品中的菌落数为（156+178+191）÷3÷0.1×10⁵=1.75×10⁸个。

答案为：（1）尿素     酚红     （2）稀释涂布平板  1.75×10⁸个

疑难问题的解析：

人教版教材中，涂布分离法统计的菌落个数应介于30～300之间（如下截屏），指的是统计菌落数，目的不是分离菌落。意思是只要有菌落生长就可以计数，不需要菌落生长到一定的大小。

这个数量和浙科版酵母菌的计数道理一样（如下截屏）。

而浙科版教材中，为什么是每个培养皿最适宜的是20个以内（如下截屏）？那是因为目的是分离菌种，接下来，我们还需要把菌种进行扩大培养或保藏，需要生长到一定的大小，如果数量太多，不能得到单菌落，意思是重叠（如下图）。所以，不能太多。