克隆“多莉”的操作程序_浙江嘉兴王甫荣

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克隆“多莉”的操作程序

(2020-01-28 15:18:48)

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分类：疑难问题的解决

学生的问题：营养限制性培养的作用是细胞周期同步化，但是乳腺细胞这种高度分化的细胞第一没有细胞周期，第二血清饥饿是不是可以理解为可以让乳腺细胞中功能性蛋白质丢失从而促进核全能性表达？望解答。

这几天空闲时间看了微博，有学生问到了克隆“多莉”时营养限制性培养的目的，在教学中，一直是说这样的目的是细胞同步化，可以用血清饥饿法处理，但回答上述学生的问题显然是不够的。翻开《细胞工程》（王蒂主编）第276页，讲述了克隆“多莉”的操作程序，过程并不是教材所说的这么简单。

克隆“多莉”过程如下图所示：

提供的乳腺细胞：Wilmut用的6岁的芬兰白面绵羊妊娠后的1/3期间，乳腺细胞上皮细胞作为核供体。采集乳腺实质组织，经乳腺上皮细胞分离，克隆和传代培养、建立细胞系。然后8细胞的培养液中的血清浓度从10%降低到0.5%，并培养5天，使细胞在培养期内脱离周期而停止在G0期。

核供体：苏格兰黑面绵羊经过促性腺激素释放激素（GnRH）后28－33小时后，回收的成熟卵母细胞。

然后，以G0期的细胞作为核供体移入去核的卵母细胞。将277枚重构胚培养后，有29枚发育成桑囊胚移植到受体后，有5头妊娠，最后产下一只乳腺上皮克隆“多莉”。

总结：从上述过程来看，乳腺细胞是经过培养的，是建立的细胞系，有增殖能力；血清饥饿应该是限制了细胞增殖所必需的某些营养。

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