一系列半乳糖醛酸标准溶液

试题研究：最近Z20模拟试题中出现咔唑比色法测定果胶实验，教材中没有出现此实验，但可以用亚硝酸盐的测定实验得到迁移，特别是标准曲线的制作。此实验也是食品工业普通的实验，当然测定果胶物质的方法有称量法、咔唑比色法、果胶酸钙滴定法、蒸馏滴定法等。

一、实验原理：

果胶经水解可生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸在强酸中可与咔唑试剂发生缩合反应，生成紫红色化合物，该紫红色化合物的呈色强度与半乳糖醛酸含量成正比，故可通过测定吸光值对果胶含量进行定量。

此法适用于各类食品的果胶含量的测定，具有操作简便、快速、准确度高、重现性好等特点。

二、实验仪器：

分光光度计，恒温水浴锅，95%乙醇或无水乙醇等。

三、实验步骤：

1、样品处理（略）

2、提取果胶（略）

3、标准曲线制作

取8支50mL比色管，各加入12mL浓硫酸，于冰水浴中边冷却边缓缓依次加入浓度为0、10μg/mL、20μg/mL、30μ/ml、40μ/L、50μg/mL、60μg/mL、70μg/ml的半乳糖醛酸标准溶液2mL，充分混合后，再置于冰水浴中冷却。然后在沸水浴中准确加热10min，迅速冷却到室温，各加入0.15％咔唑试剂1mL。充分混合，室温下放置30min，以半乳糖醛酸含量为0的半乳糖醛酸标准溶液为空白，在530nm波长下测定吸光值，以半乳糖醛酸含量为纵坐标，吸光值为横坐标，绘制标准曲线。

4、样品提取液的测定

取果胶提取液，用水稀释到适当浓度(含半乳糖醛酸10～70μg/mL)。取2mL稀释液于50mL比色管中，以下按制作标准曲线的方法操作，测定吸光值。从标准曲线上查出半乳糖醛酸的浓度(μg/mL)。

5、计算（略）

四、注意事项

1、本法的测定结果以半乳糖醛酸表示，不同来源的果胶中半乳糖醛酸的含量不同，如甜橙为77．7％，柠檬为94．2％，柑橘为96％，苹果为72％～75％，若把结果换算为果胶的含量，可按上述关系计算换算系数。

2、样品处理时应充分洗涤去除糖分，减少其存在对咔唑的呈色反应的影响。

3、在测定样液和制作样液标准曲线时，应使用相同规格、同批号的浓硫酸，以保证浓度一致，减少硫酸浓度对咔唑的呈色反应的影响。