α-淀粉酶的固定化亲和层析洗脱液的理解

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教育α-淀粉酶的固定化亲和层析洗脱液 |
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疑难问题:选修1教材中出现了“亲和层析洗脱液”,通过对照实验来确定糊精的产生,(1)淀粉溶液+指示剂:呈蓝色,(2)亲和层析洗脱液+指示剂:呈红色,贮于冰箱几天后重复实验:呈红色。而我们实验在操作过程中并没有用到“亲和层析洗脱液”,我在想是不是这样的操作实验更明显?洗脱的作用是洗脱糊精,让实验更明显?
首先要明确石英砂的吸附原理:
石英砂吸附酶的物理吸附也称范德华吸附,它是由吸附质和吸附剂分子间作用力所引起,此力也称作范德华力。由于它是分子间的吸力所引起的吸附,所以结合力较弱,吸附热较小,吸附和解吸速度也都较快。被吸附物质也较容易解吸出来,所以物理吸附在一定程度上是可逆的。
其次要明确亲和层析法的原理:
生物体中许多大分子化合物具有与其结构相对应的专一分子可逆结合的特性,如抗原与抗体,酶与底物或抑制剂,激素与受体等,这种结合往往是专一的而且是可逆的,生物分子间的这种结合力称为亲和力,亲和层析的分离原理简单地说就是通过将具有亲和力的两个分子中的一个固定在不溶性的基质(也称载体)上,利用分子间亲和力的特异性和可逆性,对另一个分子进行分离纯化。
被固定在基质上的分子称为配体,配体与基质共价结合,构成亲和层析的固定相,称为亲和吸附剂。
例如,分离蛋白质的过程中,蛋白质的生物特异性可以帮助选择特异性的配体,一般是目的蛋白质与配体结合而不吸附杂质。蛋白质吸附后再利用洗脱液的快速变换和加入竞争剂的方法进行洗脱。
最后明白α-淀粉酶的固定化亲和层析洗脱液的作用:
从以上的原理和方法来看,洗脱液(应该要不同的成分,不同的洗脱物)在固定化酶实验中是不是应该洗脱糊精,因为糊精的分子也足够大,会吸附在石英砂上,这样可以让对照实验更明显。