聚合酶链反应(PCR)扩增和化学方法人工合成目的基因的区别

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(试题)下列获取目的基因的方法中需要模板链的是( D )
①从基因文库中获取目的基因
②利用PCR技术扩增目的基因
③反转录法
④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成
A.①②③④B.①②③ C.②③④ D.②③
分析:通过DNA合成仪利用化学方法人工合成不需要模板。人工合成DNA序列可以说是一种从无到有的合成,例如ATCG四核苷酸序列,先将G的 5’端利用特定进行保护,3’暴露,然后加入3’端保护的C,并进行合成反应,这样就可以合成3'CG5',然后去掉C3’保护基团,再加入3’端受保护的T,继续缩合,这样依次进行,最后合成所需要的核苷酸序列。
这与PCR的原理是不同的。
一般情况下,聚合酶链反应(PCR)扩增目的基因用的是PCR仪,化学方法人工合成目的基因是通过DNA合成仪合成。
PCR仪:利用DNA聚合酶对特定基因做体外扩增的仪器(生物酶反应)。PCR仪需要模板、引物和聚合酶,本质是生物合成,一般采用一对引物,合成的是双链DNA,无需固相载体。合成的模板序列可以是已知的也可以是未知的。
DNA合成仪:利用化学的方法,用于合成结构上类似DNA或RNA的寡核苷酸的自动化仪器(化学反应)。合成仪无需模板和引物、DNA聚合酶,而是按照人们预先设定的DNA序列,从无到有,从头合成,以循环的化学反应合成出DNA链(第一个是挂在固相载体上的,以后每次反应通过提供底物-连接反应-洗涤等步骤),而且是单链。
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