我们要如何控制游离生物素测定培养基配制的操作环境？

 

百欧博伟生物：控制游离生物素测定培养基的配制环境是确保培养基纯度、避免外源生物素污染（干扰测定结果）和杂菌污染的关键。由于生物素在环境中广泛存在（如空气尘埃、皮肤分泌物、水质残留等），操作环境需严格控制，具体措施如下：

 

一、核心环境要求：洁净与低生物素残留

 

游离生物素测定依赖指示菌的生长量与生物素浓度的线性关系，若环境中存在微量外源生物素，会直接导致测定值偏高。因此，操作环境需满足：

 

洁净级别：至少达到10000 级洁净室（局部 100 级，如超净工作台），减少空气中的尘埃颗粒（可能携带生物素或杂菌）。

 

生物素低残留：避免环境表面、器具、试剂被含生物素的物质（如鸡蛋、牛奶、化妆品、维生素制剂等）污染。

 

二、操作空间的控制

 

1、专用实验区域划分

 

设置独立的培养基配制室，与微生物培养室、样品处理室分开，避免交叉污染。

 

室内禁止存放含生物素的试剂或物品（如复合维生素、动物血清、乳制品样品等），张贴“禁止带入生物素相关物质”标识。

 

2、空气净化与流通

 

安装高效空气过滤器（HEPA），确保空气经过滤后进入操作区，换气次数≥15 次 / 小时，维持室内正压（防止外界未过滤空气渗入）。

 

配制操作需在垂直流超净工作台内进行（优于水平流，避免操作者呼出气体污染），工作台需定期（每 3 个月）检测风速和洁净度，过滤器失效后及时更换。

 

操作前 30 分钟开启工作台的风机和紫外灯（254nm 波长），对台面和空气进行消毒（紫外可破坏生物素的分子结构，辅助降低残留）。

 

三、环境表面的清洁与去污染

 

1、台面与设备的处理

 

操作台表面、实验台、冷藏柜等，每日用0.1% 稀盐酸溶液擦拭（生物素易溶于酸性溶液，盐酸可有效去除表面残留的生物素），再用蒸馏水擦拭 2 次（避免盐酸残留影响培养基 pH）。

 

禁止用含生物素的清洁剂（如某些含维生素的天然清洁剂），推荐使用中性洗涤剂先去除油污，再按上述步骤去生物素。

 

2、地面与墙面的维护

 

地面每日用1% 过氧乙酸溶液拖地（过氧乙酸兼具杀菌和分解生物素的作用），墙角、缝隙需重点清洁，避免尘埃堆积。

 

墙面、门窗每周用蒸馏水擦拭，减少表面附着物。

 

四、人员操作的环境控制

 

1、个人防护与清洁

 

操作人员需穿专用洁净服（长袖、连体式，覆盖头发和鞋子），戴一次性无菌手套（避免皮肤分泌的生物素污染），手套每小时更换 1 次，或接触非无菌区域后立即更换。

 

操作前用75% 酒精对手套和手臂进行消毒，避免使用含保湿成分（可能含生物素）的护手霜。

 

禁止在操作区内饮食、交谈（避免唾液飞沫中的生物素或微生物污染），必要时戴防护面罩。

 

2、操作行为规范

 

所有操作在超净工作台的无菌操作区中央进行（远离出风口和边缘，避免气流扰动导致污染）。

 

打开试剂瓶或容器时，瓶口需对着工作台的出风口，避免手或身体遮挡气流。

 

分装培养基时，避免溶液溅出（若溅出需立即用稀盐酸擦拭清洁，再用蒸馏水冲洗）。

 

五、水与气体的控制

 

1、实验用水的纯度

 

培养基配制需使用超纯水（18.2 MΩ?cm），且储水容器需专用（避免与其他实验用水混用），每周用稀盐酸浸泡容器 1 次，去除内壁可能吸附的生物素。

 

2、气体来源的净化

 

若使用氮气或压缩空气辅助操作（如吹干玻璃器皿），气体需经0.22 μm 滤膜过滤，去除其中的微生物和尘埃颗粒。

 

六、环境监测与维护

 

定期检测生物素残留：每月用“生物素检测试纸”或空白培养基（不含生物素）接种指示菌，若指示菌生长，说明环境存在生物素污染，需彻底清洁并排查污染源。

 

微生物污染监测：每周在操作台面和空气中放置“沉降菌培养皿”（37培养 48 小时），菌落数需≤1 CFU / 皿（100 级环境标准）。

 

设备维护记录：建立超净工作台、空气过滤器、灭菌锅的维护日志，记录清洁、更换、校准时间，确保设备处于正常运行状态。

 

通过以上措施，可从空间、空气、表面、人员、物料等多维度控制操作环境，最大限度减少外源生物素和杂菌的干扰，保证游离生物素测定培养基的质量和测定结果的准确性。

 

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