菊糖生化管的使用前准备与具体操作步骤及注意事项！

 

百欧博伟生物：菊糖生化管的使用方法需严格遵循微生物操作规范，核心是通过接种纯培养的待检菌，观察其对菊糖的发酵能力（产酸或产酸产气），从而辅助菌种鉴定。具体步骤如下：

 

一、使用前准备

 

1、试剂检查

 

确认菊糖生化管在保质期内，包装完好（无破损、无污染）。

 

观察培养基状态：液体培养基应澄清，无浑浊、沉淀或颜色异常（正常为红色，因含酚红指示剂）；若有污染或变质，禁止使用。

 

2、无菌操作准备

 

超净工作台或生物安全柜消毒（紫外照射 30 分钟，再用 75% 酒精擦拭台面）。

 

准备接种工具（如灭菌接种环、移液枪及无菌吸头）、待检菌纯培养物（单菌落）、记号笔等。

 

二、具体操作步骤

 

1、标记

 

用记号笔在菊糖生化管管壁标注待检菌名称、接种日期、操作者等信息，避免混淆。

 

2、接种

 

用灭菌接种环（经火焰灼烧灭菌，冷却后）挑取单个纯菌落（确保无杂菌污染，这是结果准确的关键）。

 

将接种环伸入菊糖生化管的液体培养基中，轻轻搅动数次，使菌均匀分散于培养基中；或用无菌移液枪吸取少量菌悬液（浓度适中）加入生化管，混匀。

 

若生化管内有倒置小导管（用于检测气体），接种时避免触碰导管，防止气泡混入影响结果判断。

 

3、培养

 

将接种后的菊糖生化管置于 35-37恒温培养箱中培养，常规培养 18-24 小时；部分发酵能力较弱的菌种（如某些真菌）需延长至 48 小时，但最长不超过 72 小时（避免杂菌污染干扰结果）。

 

同时建议设置阳性对照（如肺炎链球菌，已知可发酵菊糖）和阴性对照（如甲型溶血性链球菌，已知不发酵菊糖），以验证试剂有效性。

 

4、结果观察与判断

 

培养结束后，取出生化管观察颜色变化及是否有气体产生：

 

阳性结果：培养基由红色变为黄色（因发酵菊糖产酸，pH 下降，酚红指示剂变色）；若有气体产生，倒置小导管内会出现气泡（气体占据导管空间，呈中空状态）。

 

阴性结果：培养基保持红色，无颜色变化，倒置小导管内无气泡（仍充满液体）。

 

三、注意事项

 

1、纯培养要求

 

必须使用单菌落接种，若待检菌含杂菌，可能导致假阳性或假阴性（如杂菌本身可发酵菊糖），严重影响结果准确性。

 

2、接种量控制

 

接种菌量不宜过多（避免培养基营养过剩或代谢产物干扰），以单菌落少量接种为宜；菌悬液浓度过高可能导致培养基提前变色，需严格控制。

 

3、培养时间把控

 

培养不足 18 小时可能因发酵不完全导致假阴性；超过 72 小时可能因细菌代谢产物积累（如非菊糖发酵产生的酸）或杂菌污染，导致结果误判。

 

4、安全操作

 

涉及病原微生物时，需在相应等级的生物安全柜中操作，避免交叉污染或操作人员感染；使用后的废弃试剂需按医疗废弃物规范处理（如高压灭菌后丢弃）。

 

通过以上步骤，可准确判断待检菌对菊糖的发酵能力，为链球菌、隐球菌等微生物的鉴定提供关键生化依据。

 

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