微生物冻干粉菌种培养时防污染措施及具体操作规程！

 

百欧博伟生物：在微生物冻干粉菌种培养过程中，防止污染是确保实验结果准确性和菌种纯度的关键。污染可能来自环境、操作工具、操作人员或培养基本身，需通过严格的操作规范和环境控制来避免。以下是具体的防污染措施：

 

一、环境与区域控制

 

1、专用洁净区域操作

 

在生物安全柜（BSC）、超净工作台或无菌室中进行所有操作，操作前需启动设备至少 30 分钟，确保空气过滤和气流稳定。

 

定期对洁净区域进行消毒：用 75% 酒精擦拭台面、侧壁及设备表面，每周用紫外灯照射 30 分钟以上（无人状态），每月进行环境微生物监测（如沉降菌检测）。

 

2、分区操作

 

将 “菌种复苏区”“培养基制备区”“接种培养区” 严格分开，避免交叉污染（如培养基制备的污染物扩散到接种区）。

 

二、培养基与试剂的无菌性保障

 

1、培养基的灭菌与验证

 

培养基需严格按照规定条件灭菌（如高压蒸汽灭菌 121、15-30 分钟），灭菌后通过无菌试验验证（37培养 24-48 小时，观察是否有杂菌生长）。

 

避免使用过期、结块或外观异常（如浑浊、沉淀、霉斑）的培养基，液体培养基若有絮状物或颜色异常需立即丢弃。

 

2、试剂与耗材的无菌处理

 

接种环、移液枪头、试管、培养皿等需经干热灭菌（160-180、2-3 小时）或高压灭菌，灭菌后妥善存放于无菌容器中，避免开封后暴露在非洁净环境。

 

液体试剂（如稀释液、缓冲液）需灭菌后使用，瓶口需用 75% 酒精消毒后再开启。

 

三、操作工具的无菌处理

 

1、接种工具的灭菌

 

接种环/针每次使用前后需在酒精灯火焰上灼烧至红热（全程避免触碰非无菌区域），冷却后再接触菌种或培养基（避免高温杀死目标菌）。

 

移液枪使用无菌枪头，每换一种试剂或样本需更换枪头，避免交叉污染。

 

2、容器的无菌操作

 

试管、培养皿的盖子打开后，开口朝下或斜放，避免直接暴露于空气中；操作完毕后立即盖紧，减少暴露时间。

 

冻干粉安瓿瓶开启前，需用 75% 酒精擦拭外壁，砂轮划痕后再次消毒，折断时避免玻璃碎屑落入菌粉中（可在无菌操作台内完成）。

 

四、操作人员的规范操作

 

1、个人防护与手部消毒

 

操作前需更换无菌实验服、戴无菌手套（手套需用 75% 酒精擦拭消毒），必要时戴口罩、帽子，避免头发、皮肤碎屑或呼吸飞沫污染。

 

每次操作前、接触非无菌物品后，需用 75% 酒精消毒手部或更换手套。

 

2、严格的无菌操作流程

 

冻干粉复苏时，溶解液（如无菌生理盐水、培养基）需缓慢注入安瓿瓶，轻轻混匀，避免剧烈震荡导致液体飞溅。

 

接种时，试管口、培养皿边缘需在酒精灯火焰附近（约 5-10cm）操作，利用火焰形成的无菌气流屏障减少污染。

 

避免在操作区域交谈、咳嗽，头部不要过度靠近敞口的容器，操作速度适中，避免慌乱导致失误。

 

五、培养过程的监控

 

1、培养环境的清洁

 

培养箱需定期消毒（如用 75% 酒精擦拭内壁，或用甲醛熏蒸），托盘内的冷凝水需及时清理（避免细菌滋生），不同菌种的培养皿需分开存放，标注名称和日期。

 

观察培养物时，需在无菌操作台内打开培养皿，避免在普通环境中暴露；发现疑似污染的培养物（如杂菌菌落、培养基浑浊）需单独处理，避免交叉污染其他样本。

 

2、污染后的处理

 

若发现污染，立即停止操作，污染的培养物、耗材需高压灭菌后再处理，操作区域用含氯消毒剂彻底消毒，排查污染源头（如设备故障、操作失误、培养基问题等）。

 

六、其他注意事项

 

定期对实验人员进行无菌操作培训，考核合格后方可上岗。

 

菌种复苏与培养的全过程需做好记录（如操作时间、操作人员、培养条件、观察结果），便于污染溯源。

 

对高致病性菌种，需严格遵循生物安全等级要求，避免实验室感染和环境泄漏。

 

通过以上多环节的严格控制，可最大限度降低微生物冻干粉菌种培养过程中的污染风险，确保菌种的纯度和实验结果的可靠性。

 

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