你知道如何选择适合的培养基来培养肠道巴氏杆菌吗？

 

百欧博伟生物：选择适合培养肠道巴氏杆菌的培养基，需结合其生物学特性（如营养需求、代谢特点）和培养目的（如分离、纯化、鉴定），以下是具体的选择指南和推荐方案：

 

一、肠道巴氏杆菌的核心培养需求

 

肠道巴氏杆菌属于革兰氏阴性兼性厌氧菌，其生长依赖以下条件：

 

营养要求较高：需富含蛋白质、氨基酸和生长因子（如血液、血清中的营养成分），普通基础培养基（如营养琼脂）难以满足其生长需求。

 

氧气耐受性：可在有氧环境中生长，但部分菌株在微需氧或厌氧条件下生长更佳。

 

生化特性：氧化酶阳性、触酶阳性，不发酵乳糖（多数菌株），可作为鉴别依据。

 

二、推荐培养基类型及适用场景

 

1、基础增菌培养基：用于样本中少量巴氏杆菌的富集

 

推荐：含血清的肉汤培养基

 

配方：普通肉汤（蛋白胨、牛肉膏、氯化钠）中添加 5%-10% 灭活动物血清（如牛血清、马血清）或全血。

 

原理：血清提供生长因子（如维生素、氨基酸），促进巴氏杆菌增殖，尤其适用于粪便、肠道内容物等含杂菌较多的样本，可先通过增菌提高检出率。

 

培养条件：35-37，需氧或 5% CO环境，培养 18-24 小时。

 

2、分离纯化培养基：用于从混合菌中分离单个菌落

 

推荐 1：血琼脂平板（Blood Agar）

 

配方：基础琼脂 + 5%-10% 脱纤维羊血或兔血。

 

特点：肠道巴氏杆菌在血琼脂上生长良好，形成圆形、光滑、湿润、边缘整齐的小菌落（直径 1-2mm），多数菌株不溶血（少数可能出现 α- 溶血），可与溶血的致病菌（如链球菌）区分。

 

优势：操作简便，适合初步分离，且能通过溶血特性初步鉴别。

 

推荐 2：巧克力琼脂（Chocolate Agar）

 

配方：血琼脂经 80-90加热使血红蛋白释放，形成褐色培养基。

 

特点：营养更丰富（加热后的血液成分更易被利用），适合营养需求更高的巴氏杆菌菌株，尤其适用于样本中菌量极少的情况。

 

3、选择性培养基：用于抑制杂菌，提高分离效率

 

肠道巴氏杆菌对某些抗生素敏感，需谨慎选择选择性培养基（避免抑制目标菌），推荐：

 

改良麦康凯琼脂（不含结晶紫或低浓度结晶紫）

 

原理：普通麦康凯琼脂含结晶紫和胆盐，可抑制革兰氏阳性菌，但高浓度结晶紫可能抑制巴氏杆菌。改良后降低结晶紫浓度，既保留对杂菌的抑制，又允许巴氏杆菌生长（因巴氏杆菌不发酵乳糖，菌落呈无色透明）。

 

适用场景：样本中革兰氏阴性杂菌（如大肠杆菌）较多时，可提高分离纯度。

 

哥伦比亚血琼脂 + 抗生素添加剂（如万古霉素、杆菌肽）

 

原理：添加针对革兰氏阳性菌的抗生素（万古霉素等），抑制肠道中的葡萄球菌、链球菌等，而巴氏杆菌对其不敏感，可选择性生长。

 

4、鉴别培养基：用于生化特性鉴定

 

结合肠道巴氏杆菌的生化反应（氧化酶阳性、不发酵乳糖等），可选用：

 

氧化酶试验培养基：挑取菌落与氧化酶试剂反应，阳性（紫色）可初步确认（与沙门氏菌、大肠杆菌等氧化酶阴性菌区分）。

 

糖发酵管：检测对葡萄糖、乳糖的发酵能力（多数巴氏杆菌发酵葡萄糖产酸不产气，不发酵乳糖），与发酵乳糖的大肠杆菌区分。

 

三、选择培养基的注意事项

 

优先满足营养需求：无论选择哪种培养基，必须保证含血清或血液成分，否则肠道巴氏杆菌可能不生长或生长微弱。

 

避免过度抑制：选择性培养基需先验证，确保目标菌能生长，避免因抗生素浓度过高导致漏检。

 

结合样本类型：

 

若样本为新鲜粪便（杂菌多）：先增菌（血清肉汤），再接种血琼脂或改良选择性培养基。

 

若样本为纯培养物（如菌落纯化）：直接接种血琼脂或巧克力琼脂即可。

 

参考培养条件：培养基需配合适宜的温度（35-37）和气体环境（需氧或微需氧），否则即使培养基合适，也可能影响生长。

 

四、总结

 

培养肠道巴氏杆菌的核心是提供富含血清/血液的营养环境，首选血琼脂平板（分离纯化）和含血清的肉汤（增菌）；若需抑制杂菌，可选用改良的低选择性培养基（如低结晶紫麦康凯琼脂）。同时，需结合生化试验（如氧化酶阳性）进一步确认，确保与其他肠道菌区分。

 

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