15P-1小鼠睾丸上皮细胞的处理方法与培养步骤！

一、细胞简介

15P-1细胞来源于在生精上皮中表达多瘤病毒(PyLT)大T蛋白的转基因小鼠的睾丸细胞。该细胞表现出支持细胞(Sertoli cells)的特征，包括转录威尔姆斯肿瘤(WT1)和Steel基因。据报道，15P-1培养物呈现出吞噬活性，乳胶颗粒的内吞和死细胞的清除就证明了这个吞噬活性。与生殖细胞的相互作用增强了15P-1细胞的吞噬活性。与二倍体的减数分裂前期的生殖细胞共培养时，该细胞支持精原细胞经减数分裂和减数分裂后分化成为表达鱼精蛋白(Prm-1)基因的单倍体精子。

二、产品信息

平台编号：Bio-107453

规格：1×10Cells/T25培养瓶

细胞信息：15P-1

细胞名称：15P-1 (小鼠睾丸上皮细胞) (种属鉴定正确)

种属：小鼠

生长特性：贴壁细胞

细胞形态：上皮细胞样

生长培养基：DMEM＋10% FBS＋1% P/S

冻存条件

冻存液：55% 基础培养基+40S+5%DMSO

温度：液氮

培养条件

气相：空气，95%；CO2，5%

温度：32

推荐传代比例：1:3-1:4

推荐换液频率：2~3次/周

注意事项：该细胞为32 5%二氧化碳培养条件，请提前准备专用培养箱。

背景描述：The 15P-1 cell line was established from testicular cells of transgenic mice that express the large T protein of polyoma virus (PyLT) in the seminiferous epithelium.

年龄（性别）：雄性，6月龄

组织来源：睾丸

细胞类型：转化细胞系

生物安全等级：2

用途：(种属鉴定正确)

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

三、细胞培养步骤

1、培养基及培养冻存条件准备:

1)准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

3)冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。

2、细胞处理:

1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中,再添加10%DMSO后进行冻存。

对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

1、弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2、加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3、按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。

4、将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

四、注意事项

1、收到小鼠睾丸上皮细胞15P-1后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们。

2、仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。

3、用75%酒精擦拭细胞瓶表面,显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落,将细胞置于培养箱内静置培养过夜,隔天再取出观察。此时多数细胞均会贴壁,若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝染色测定细胞活力,如果证实细胞活力正常,请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养;如果染色结果显示细胞无活力,请拍下照片及时和我们,信息确认后我们为您再免费寄送一次。

4、请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件。

5、建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和公司技术部沟通交流。

6、该细胞只能用于科研,不得用于。