霉菌斜面转接培养的实验原理与操作步骤！

 

一、开箱检查

 

打开包装箱，查看斜面是否破损，菌株编号与说明书是否一致。

 

二、实验准备

 

仔细阅读菌株说明书，准备2个新鲜平板或斜面。

 

三、器材灭菌

 

斜面试管表面消毒后，转移至生物安全柜中，管口灼烧灭菌冷却备用。接种锄和接种铲在酒精灯外焰翻转灼烧灭菌3-5分钟，冷却备用，冷却后用接种锄在斜面上相距0.5cm处切两条平行线（与试管垂直）。

 

四、切分斜面

 

换接种铲在两条平行线之间相距0.5cm处切两条平行线（与试管平行），形成0.5cm*0.5cm的小正方形菌块。

 

五、霉菌转接

 

用接种铲挑取菌块平放到平板或斜面（固体琼脂表面）上（菌块正面朝上）。转接多个平板或斜面，重复以上操作即可。

 

六、完成培养

 

平板正放，斜面倾斜放置于霉菌培养箱中培养。（参照菌种说明书上的培养条件设置温度）

 

（1）实验材料 

 

根霉，毛霉，黑曲霉，青霉，土豆琼脂培养基，培养皿，载玻片，盖玻片，镊子，显微镜，小刀，U形管等。 

 

（2）实验步骤 

 

1、配置培养基：根据原料用量配置土豆培养基。配置时，先急火煮沸，在温火加热20min，若有浑浊出现，则需过滤，然后定容。包扎土豆培养基，甘油等其他用品。灭菌后取出备用2、培养小室准备及灭菌 在培养皿底部铺一张略小于皿底的圆形滤纸片，滤纸片上依次放上“U”形载玻片搁架、载玻片、盖玻片-四片，盖上皿盖，牛皮纸包扎，于恒温干燥箱中121灭菌30min烘干备用；

 

2、琼脂薄片制作：

 

a)将稍微冷却的培养基，倒在培养皿中，做成薄平板。培养基应该要倒 得薄而均匀。注意无菌操作。

 

b)用解剖刀将琼脂薄平板切成边长不大于1cm的琼脂薄片

 

c)用解剖刀将琼脂薄片移至小室载玻片上（一个载玻片上方两块薄片）

 

3、取菌接种：用接种环挑取少量待观察的霉菌孢子（霉菌菌种的表面轻轻刮取即可），接种于固体培养基边缘，以便于霉菌生长。接种时只要将带菌的接种环在载玻片上轻轻碰几下即可。接种量要少，以免培养后菌丝过于稠密而影响观察。

 

4、加盖玻片：用无菌镊子将皿内的盖玻片盖在琼脂薄层上，用镊子轻压盖玻片，使盖玻片和载玻片之间的距离相当接近，但不能压扁。盖玻片不能紧贴载玻片，要彼此留有小缝隙，一是为了通气，二是使各部分结构平行排列，易于观察。

 

5、倒保湿剂：每皿倒入约2-3mL 20%的经灭菌处理的甘油，使皿内滤纸完全湿润，以保持皿内湿度，盖上皿盖。制成载玻片湿室。

 

6、正置培养：将平皿置于27霉菌培养箱中培养一周。

 

7、观察：将培养好的载玻片取出，置于显微镜下直接观察。 

 

（3）实验结果及分析 

 

实验结果 

 

1、根霉：菌丝无隔，有假根、匍匐菌丝。假根着生处有向上直立的孢囊梗，其顶端膨大成孢子囊，底部为半球形囊轴。

 

2、毛霉：孢囊梗直接由菌丝出，顶端为球形孢子囊 

 

3、黑曲霉：菌丝有隔，气生菌丝分化为分生孢子梗（无隔），顶端 膨胀为球状顶囊。

 

4、青霉：菌丝有隔，分生孢子梗顶端不膨大，无顶囊，多次分枝成几轮小梗，小梗顶端长孢子。分生孢子梗呈扫帚状。

 

如何让霉菌产孢子？

 

一般微生物都会在逆境下产孢子，比如低温、紫外照射等恶劣的生存条件，有的情况下，阳光照射也能促使产孢。不同的菌的产孢条件还不太一样，要因菌而异，和培养基也有关。可以找找相关资料查查产孢培养基，可以试试水琼脂培养基（直接在水中加琼脂、无其他营养物质）。

 

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