1、OD值偏低

我用洗板机和手洗都差不多。但是比别人的低。别人就用手洗，他末点OD值能到2.100 。我才1.700。不知道是为什么？

（1）试剂盒在运输途中时间太长，温度太高

     解决方法：尽量缩短运输时间，夏季应放冰块降温。

（2）试剂盒未充分平衡

     解决方法：试剂盒从2～8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温（约25℃）。

（3）培养箱温度不足37℃

     解决方法：注意培养箱温度，放入反应板后尽量减少开启次数以免影响温度恒定，非隔水式培养箱尤其应注意。

（4）保温时间不足

     解决方法：校正定时钟准确定时

（5）洗涤时冲击力太大、浸泡时间过长、洗涤次数增加

     解决方法：按说明书要求保留洗涤时间，准确记住洗涤次数

（6）移液器吸液量不足，吸嘴内壁挂水太多或内壁不清洁

     解决方法：校正移液器，吸嘴要配套，装吸嘴时要紧密，吸嘴内壁要清洁，最好一次性使用

（7）蒸馏水水质有问题

     解决方法：使用新鲜合格的蒸馏水

（8）底物作用时间不足

     解决方法：准确定时

2、空白孔OD值偏高

   这段时间做ELISA空白孔OD值高，这是什么原因啊？

（1）洗板的问题

充分洗涤拍干

（2）抗体的特异性不够

     抗体纯化一下

（3）板子封闭不好

选择一个比较好的封闭液：10%小牛血清，5%蔗糖，1%酪蛋白，0.5%明胶其次，用刚才给你封闭液配方配酶稀，酶的浓度你需要做个梯度，选择本底低，OD高的酶的稀释度。反应时间不要太长，酶一般45min可以了，显色时间不要太长，及时终止。

（4）二抗使用浓度过高

     应滴度调整；或者包被浓度偏高等。

3、酶标板包被有抗原，用稀释液稀释配好的羊抗鼠酶标二抗，分别在4°和37°下放置了20天，做标准曲线对照，0标的OD值都一样，但后面5个标准品对应测得的OD值4°的都比37°的高，而且越靠后，OD值差距越大，最后一个标准品对应的OD值，4°比37°高出0.6；在不加标准品和一抗的情况下，只加4°保存的羊抗鼠酶标二抗，温育60min后，洗板拍干再加TMB底物液显色，结果OD值竟然达到0.8；37°的达到0.15；但刚配完时采用相同的方法测得OD值只有0.06；此过程排除加样错误。

 （1）二抗一般都是现用现配，而且是放在4度，37度稳定性很差

 （2）标准品和包被在酶标板上的抗原竞争一抗，除掉游离相后再加二抗

 （3）二抗温育一个小时，一般多少会影响本底