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transwell小室膜上细胞染色后如何封片?transwell实验技术

(2013-09-04 18:39:35)
标签:

transwell

细胞

小室

肿瘤

分类: Transwell

 Transwell是一种实验技术,这项技术的主要材料是Transwell小室(Transwell chamberTranswell insert),其外形为一个可放置在孔板里的小杯子,杯子底层的一张有通透性的膜,而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。这层膜带有微孔,孔径大小有0.112.0µm,根据不同需要可用不同材料,一般常用的是聚碳酸酯膜(polycarbonate membrane)。

 transwell小室膜上细胞染色后如何封片吗?另外matrigel买回后要分装吗?作侵袭实验coster的24孔的transwell上室应加多少体积matrigel?

做法:
1 封片: 将膜用小剪刀从内面边沿裁掉,放到载玻片上,注意细胞面朝上,然后滴一滴树胶,盖玻片封片。
2 分装一下好些,用不完的部分不要稀释。
3 加多少体积偶没有注意,要将PVPF膜充分遮盖,加入的液体不能流到pvpf膜上,也就是不能漏,否则会影响实验结果。

   细胞迁移与侵袭实验常用8.0、12.0µm膜,上室种肿瘤细胞,下室加入FBS或某些特定的趋化因子,肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑,计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。但细胞侵袭实验与迁移实验不同的是,聚碳酸酯膜上室侧铺上一层基质胶,用以模仿体内细胞外基质,细胞欲进入下室,先要分泌基质金属蛋白酶(MMPs)将基质胶降解,方可通过聚碳酸酯膜。

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