转染是否成功的影响因素很多，如需要转染的细胞类型（对于困难的细胞系尤其如此），需要被转染的分子（DNA、RNA、寡核苷酸、蛋白质），转染试剂等。但无论在何种情况下，转染的成功均取决于转染效率、低细胞毒性以及重现性这几个要素。以下是帮大家搜集的关于细胞转染的一些时间方面的问题及解答。

  了解一下大家做细胞转染时的几个小细节：1、对于293、293T这种贴壁不是很紧的细胞系，大家都是分了细胞之后多长时间做转染呢？或者细胞长到那种密度做转染呢？

2、转染之后大家都是多久收细胞呢？或者是多大密度收细胞呢？

3、转染之后的细胞如果很长时间不收，例如48h~72h不收细胞，转进去的外源基因还有没有表达呢？表达量怎么样呢？

答：1, 铺板24-48转染 主要看你铺的密度 想24H的话可以1W每孔
2，脂质体转染24H够了，不过我们做的时候不收细胞，直接做flipr
3, 48H还没神马问题的，72就不知道了

问：想在铺板之后16h或者更短的时间内做转然可以吗？用的是维格拉斯的VigoFect脂质体？

 答： 细胞铺的密一点就行了，转染的时间根据细胞的密度吧，我一般5000细胞每孔种入24孔板。待细胞长到60——70%的时候开始转染，这个看细胞系，有的细胞长的快，种完后需要的时间短些。转染完后我们做luciferase，都是24小时后收取细胞。

  对于细胞转染，一般在细胞中期转染，转染效率会相对高一些。这个时候的细胞状态是最好的。对于HEK293T来说，一般转染的最佳时间是在传代后24hr以内。转染后48hr，外源基因肯定是有表达的。至于72hr，应该也还是有表达的，可能表达量会很低，主要是这个时间点的细胞大部分都衰老了。建议293T收集细胞，在转染后36-48hr收集。

时间进度

一般原则提示：要确保最终结果的成功；建立一个合适的时间进度进行转染实验以保证您所需要的目的蛋白能得到最佳表达。

转染的开始——在转染前12小时，将细胞分种于培养板中。在细胞达到50-80%的融合率时开始转染，这样就可以使它们在实验结束时达到接近100%的融合。细胞对转染复合物的摄取通常在0.5-6小时的时间内完成。在这段时间后，就不会再发现转染效率有所增长。

培养基更换——某些转染试剂在摄取阶段之后需要更换培养基。如果转染必须在没有胎牛血清存在的条件下进行，那么这一步骤就必不可少。而对于可在血清存在的情况下使用的无毒性转染试剂时，如果有足够的培养基用于后续表达阶段，就可以省略这一步。如果将转染复合物留在培养基中直到进行检测，那么对有些细胞系而言转染效率会有所提高，而另外一些细胞在转染开始几个小时之后其转染效率就不会再有升高。虽然在转染步骤之后转染试剂/DNA复合物通常不一定要从培养体系中清除，但在此后的长期生长阶段换用新鲜的培养基却是必须的。如果转染细胞需要生长3-7天，换培养基就尤其重要，这样一来就使它们有时间达到最高的蛋白表达量。

时间测定——转染开始后的24-48小时内，报告基因产物的浓度逐渐增加；而这种增加取决于增强子的强度、表达外源蛋白中所涉及的细胞反应，存活细胞的健康状态，以及营养因素等。在转染后等待3-7天收集蛋白进行纯化较为常见了。

最后就是平时可能会忽略的转染试剂本身的脱靶效应off-target effect，转染试剂本身对基因表达水平（高表达或低表达）的影响，有时候可能会造成假阳性的结果。

我自己的体会是，一般的细胞，用脂质体2000和fugeneHD转染效率相差不大，虽然最近有文献说脂质体2000脱靶效应很高，但国内在乎的人貌似不多；但是干细胞，原代细胞和肿瘤细胞等一些比较难转的细胞系，Fugene HD比较温和，细胞毒性很低，转染效率明显要好；悬浮细胞，各有千秋，不敢说一定可以，重在尝试，要是都不行，就电转吧。