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什么是质粒转染?贴壁/原代/悬浮细胞转染步骤

(2019-11-22 09:12:55)
标签:

质粒转染

质粒dna转染

转染步骤

转染试剂

细胞转染

首先要有质粒,然后才能转染。

第一步就是做质粒,然后继续分解。

什么是质粒?
简单地说质粒是一个载体,可以携带目的基因进入细胞。如果你要携带的是干扰基因,该基因能翻译成RNA后,可以干扰你的目的蛋白翻译,从而起到基因沉默的作用。

什么是质粒转染?贴壁/原代/悬浮细胞转染步骤


干扰基因的序列是什么,这需要你自己查资料自己设计或者找公司设计。

一般的质粒是我们成为空载,即没有携带目的基因。如果对质粒构建不是很熟悉,推荐直接找公司构建,当然,如果作为学习,自己也可以构建,但是要有多次失败,时间超长的心理准备。

那么问题就来了,如何让空载带上干扰基因,也就是所谓的做干扰质粒,可以找公司,也可以自己做。

质粒转染需要做好哪些前期准备?如何建立细胞系?在质粒的选择和转染试剂的选择上也要下很多功夫。

如何让做好的质粒进入细胞发挥作用:这个过程叫做转染。
转染的方法很多,常用的是脂质体转染(但是对细胞的毒性较大,而RFect质粒DNA转染试剂采用生物可降解材料配制,对细胞的毒性很低,转染后细胞死亡率不到10%,并能高效转染多种贴壁细胞、原代细胞和悬浮细胞,RFect 使用非常方便,先将转染试剂与质粒DNA混合,再将转染试剂-DNA复合物直接加入培养细胞中,血清不影响其转染效果,不必刻意添加或更换培养液,操作十分简便。)属于瞬时转染,具体方法可以参考试剂盒说明书,这里就不赘述了;也有用电转的,这个需要特殊的电转设备,比较麻烦,但是转染率高,相应的转染条件也高。

转染之后第一步要确定干扰效果,可以问你师兄师姐如何解决的。摸索好条件以后,就可以进行后续的看细胞形态、相关分子表达情况、细胞侵袭等试验了。

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