P_lac启动子表达载体系统

P_lac表达系统是以大肠杆菌乳糖操纵子调控机制为基础设计和构建的表达系统。大肠杆菌乳糖操纵子的启动子P_lac，控制乳糖代谢3 种酶基因Z、Y、A 的表达，受阻遏蛋白i基因的产物蛋白的负调控，当阻遏蛋白与乳糖或乳糖的类似物(如异丙基-β-D-硫代半

乳糖苷，IPTG)结合时，便发生结构改变，导致对P_lac启动子阻遏作用的消失，P_lac恢复功能，启动转录，并表达产生控制乳糖代谢的3 种酶。

以P_lac为启动子的表达载体用来表达融合蛋白的情况较多。构建载体时，将P_lac连同紧靠其下游编码β-半乳糖苷酶的Z基因一起构建在载体上，Z基因中设立多克隆位点供目的基因插入。

基因工程中用的启动子为P_lac的改造型Placuv5，它的起始效率比原型高。该类载体在有X-gal显色剂及IPTG的诱导下，呈蓝色菌落；插入目的基因破坏了Z基因的结构，可使重组克隆表现为无色菌落，这一特点有利于重组子的筛选。因目的基因的插入没有破坏Z基因与启动子的匹配关系，目的基因通常能在这种载体中得以稳定表达。但目的基因必须与Z基因的翻译阅读框一致，才能表达出正确的蛋白产物。P_lac启动子载体大都不编码阻遏蛋白，需选用含可编码阻遏蛋白的F′因子细菌作为宿主菌。图示为pWR450 表达载体的结构示意图。

此外，目前还构建了阻遏蛋白温度敏感型突变体lacqlac  q(ts) 宿主菌和表达载体，使P_lac启动子的转录受温度的控制，在低温(30)下基因的转录受到抑制，在较高温度(42)下基因的转录保持开放。