Fig.1 DNA染色法检测支原体

注：NB4、Saos2细胞为支原体阳性细胞染色结果，A549、Vero为支原体阴性细胞染色结果，图片来自于Vahid Molla Kazemiha, et al.,2016。

2. 支原体培养法

使用支原体肉汤培养基接种待测样品（细胞培养上清等），经过约7-21天的培养，观察有无支原体的生长，以此来判断细胞培养基中有无支原体存在。此种方法非常经典，得到全世界范围内认可，是被《中国药典》2015版第三部分3301，欧洲药典第六版2.6.7部分记载的支原体检测方法。虽然被广泛认可，但是需要耗时超级长（约1个月）才能知道是否有污染。小伙伴们是不是要感叹我的时间呀，我的细胞呀！我等不及呀！

Fig.2 典型的支原体克隆

注：并非所有的支原体克隆均为此形态，图片来自于Lesley Young et al.,2010。

3. PCR法

这种方法是目前最常用的方法，它的检测方式主要有凝胶电泳检测和荧光定量检测。其原理都是在支原体16S rRNA基因的保守区设计引物，通过检测支原体DNA来检测细胞中有无支原体的污染。如果有支原体的存在，则在琼脂糖凝胶电泳或者荧光定量扩增时，就可以检测到。这种方法的优点是检测灵敏度高，特异性好，检测速度快。下图是全式金生物的TransDetect^®  PCR Mycoplasma Detection Kit（FM311） 扩增结果，整个过程从取样到检测，只需要2－3个小时。超级简单，大量样品很适用哦，快来试试吧！

Fig.3 FM311灵敏度检测（PCR法支原体检测）

Fig.4 荧光定量支原体检测

注：1-6为阴性对照，7-12为不同样品的阳性对照，图片来自于Vahid Molla Kazemiha, et al.,2016。

4. 化学发光法

其原理是利用支原体内特有的酶，与提供的底物相互作用，使其中的ADP转化为ATP，荧光素酶可以利用产生的ATP与荧光素酶底物发生反应，产生可检测到的光，光可以被我们使用仪器检测到。如果没有支原体存在，荧光素酶就没有足够的ATP去发生反应产生光，仪器检测到的数值就比较低；如果有支原体存在，就可以使大量的ADP转化为ATP，供荧光素酶发生反应，产生大量的光，仪器检测到的数值就比较高。这种方法的优点是检测的灵敏度高，速度快，而且只能检测活的支原体。精确度会大幅度提高。下图是全式金公司的TransDetect^® Luciferase Mycoplasma Detection Kit（FM301）检测结果，整个过程从取样到检测，只需要30－40 min便可能得到检测结果。速度快，灵敏度高，有条件的小伙伴，速速用起来！

Fig.5 TransDetect^® Luciferase Mycoplasma Detection Kit 检测效果（化学发光法支原体检测）

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