小鼠压力应激动物造模及行为学检测方法

一.压力应激模型简介

个体对于压力应激的响应不尽相同，压力应激反应值存在显著的个体差异。个体对于压力应激响应的差异与参与其中的神经调控机制并不清楚，研究其中的系统生物学机制对于理解、诊断和治疗与压力应激有关的疾病至关重要。

压力应激动物模型的建立己成为医学领域中广泛使用的技术手段，用于研究与应激相关疾病(如焦虑症，抑郁症，药物滥用等精神和行为障碍性疾病)。在压力应激研究领域当中最常用的动物模型有束缚应激(Chronic restraint stress,CRS，慢性不可预测温和刺激模型(Chronic unpredictable mild stress, CUMS ),社交挫败(Social defeat, SD)以及早期生活压力(Early life stress, ELS)等造模方式。

二.压力应激模型造模方式

在本文中，将采用两种方式进行压力应激造模并运用多种行为学范式对小鼠的抗压力进行分类与鉴定。

1.可预测性慢性适度束缚压力应激(PCMS )造模

    准备30个左右的50 ml离心管，将离心管烫若干小孔以确保小鼠能够正常呼吸。每天在固定时间将小鼠塞入离心管给与束缚应激，时长分别为2h和5 min，持续造模4周，PCMS

2h组小鼠为20只，PCMS 5min组小鼠为10只。造模完成后将小鼠放入笼盒中，清理小鼠粪便及尿液，并用75%酒精将离心管擦拭干净晾干后于第二天继续使用。

2.多重不可预测慢性适度压力应激(UCMS )造模

    UCMS造模给与多种刺激方式进行造模，总共包括6种刺激源:束缚（restraint)、拥挤(orowding),湿垫料(wet bedding)、笼位倾斜(titled cage)、通宵照明(overnight illumination)以及昼夜颠倒(inverted light cycle)。每天不定时给与1-2种刺激来造模，持续刺激4周，UCMS组小鼠为10只。

 三.压力应激模型行为学检测方法

1.旷场实验

    正式实验前，搭建好三脚架以及录像设备确保能够清晰记录小鼠的活动轨迹，用75%酒精擦拭旷场箱并待其晾干后将小鼠小心放置于旷场试验箱中间位置，让小鼠在旷场箱中自由探索5分钟后开始录像10分钟，采用上海欣软信息科技有限公司VisuTrack高端行为学分析软件进行录像并分析，实验过程中注意保持安静，确保小鼠不受惊吓以获得可靠数据。实验结束后将小鼠小心放回笼盒中并清理小鼠粪便及尿液，喷洒75%酒精，擦拭干净后继续下一只小鼠。

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2.十字高架迷宫实验

    十字高架迷宫包含两个开放臂和两个闭臂，开放臂和闭臂相互垂直，整个十字高架迷宫距离地面58 cm。用75%酒精擦拭高架晾干后将小鼠小心放置于高架中，面部朝向开放臂，采用上海欣软信息科技有限公司VisuTrack高端行为学分析软件进行录像并分析，录像7分钟后放回笼盒中。

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3.黑白箱实验

    黑白箱包含一个黑箱和一个相同尺寸的白箱，黑白箱之间留有一小门。用75%酒精擦拭黑白箱，晾干后将小鼠小心放置在白箱中间，抽去黑箱和白箱中间的小门，让小鼠自由探索，采用上海欣软信息科技有限公司VisuTrack高端行为学分析软件进行录像并分析，对小鼠的行为轨迹进行录像5分钟，结束后将小鼠放回笼盒中。

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4.糖水偏好实验

将小鼠放在放置有两个水瓶的笼具里适应两天，将两个水瓶里的水换成2%蔗糖溶液，小鼠放进笼具继续适应两天糖水，禁水24小时后进行糖水偏好测试。将其中一瓶水换成糖水，称量未测试的每一水瓶加液体重量，将单只小鼠放进笼具中，进行测试2小时，在测试1小时后，小心将水瓶和糖水瓶的位置对换并注意不要让液体漏出，继续测试1小时，采用上海欣软信息科技有限公司自动化糖水偏好实验系统进行自动测定。糖水偏好指数定义为:糖消耗量/总液体消耗量。