PCR实验室建立方法

建立样品准备区：这个区域用作样品的准备，在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施：PCR产物和带有要扩增序列的克隆不能在这个房间操作。组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理，以根据应用的需要提取DNA或RNA。大体积样品应该用单包装的无菌一次性移液管吸取，管子打开前都要简短离心以减少气溶胶的产生，而且管子不能用力崩开，这样会产生气溶胶。任何时候都应该穿实验服和带手套，手套要经常更换，尤其在抽提过程中每一步之间都要更换。实验服要用于样品准备间，经常清洗。
   样品准备和RNA-PCR的额外步骤需要额外的样品操作，这样增加了样品之间污染的机会。为了避免这一问题，反转录一步可以在样品准备区进行。在RNA-PCR中应用UNG以防止污染的方法也有报道。
  建立前PCR区：该区用于准备各种反应，这个区域须保持干净，而且没有来自样品准备的污染。前PCR区须要有试剂和准备，特别是用于前PCR区的正压活塞式移液管。
  PCR实验室试剂的操作：所用的所有溶液都应该没有核酸和(或)核酸酶污染。所有PCR试剂中使用的水都应该是高质量的新鲜蒸馏的去离子水，用0.22μm过滤的，并且是高压。在20到25贮存的试剂建议加点像叠氮钠一类的抗微生物剂，在扩增试剂或样品制备试剂中加入0.025%的叠氮钠不抑制扩增反应。所用试剂都应该以大体积配制，实验一下看试剂是否满意，然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。所有试剂和样品准备过程中都要使用一次性的瓶子和管子。新配制的试剂在用于准备新的标本之前应该加以检验，样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。

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