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RNA提取之五--RNA完整性、浓度及纯度鉴定

(2014-01-25 15:23:38)

(1)  1%琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA完整性。
     由于细胞中70-80%的RNA为rRNA,电泳后UV下应能看到非常明显的rRNA条带,RNA样品中最大rRNA亮度应为次大rRNA亮度的1.5-2.0倍,否则表示RNA样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。
 * 动物rRNA大小分别约为5kb和2kb,分别相当于28S和18S rRNA;
 * 植物叶片中由于含有大量的叶绿体RNA,可见4条或更多rRNA;
 * 细菌rRNA大小分别约为4kb和2kb,分别相当于细菌23S和16S rRNA。

(2)  纯度
     OD260/OD280比值是衡量RNA样品中蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA样品,OD260/OD280值(10mM Tris, pH7.5)在2.0左右。OD260/OD280读数受测定所用溶液的pH值影响。同一个RNA样品,假定在10mM Tris,pH7.5溶液中测出的OD260/OD280读数在1.8-2.1之间,在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间,但这并不表示RNA不纯。

(3) 浓度
     取一定量的RNA提取物,用RNase-free水稀释n倍,用RNase-free水将分光光度计调零,取稀释液进行OD260测定,按照以下公式进行RNA浓度的计算:终浓度(ng/μl)=OD260×n (稀释倍数)×40

(4) RNA产量:
1.人和动物全血,15~20μg
2.人淋巴细胞(约7×107白细胞),60~70μg
3.肝和脾,6~10μg
4.肾,3~4μg
5.骨骼肌和脑组织,1~1.5μg
6.胎盘,1~4μg
7.上皮细胞(1×10e6 cultured cells),8~15μg
8.纤维母细胞(1×10e6 cultured cells),5~7μg

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