转基因原理课程:第六节 质粒载体的稳定性问题

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转基因是生物科技涉及到国家食品安全与国民健康人口安全,动物安全,生物安全。环境安全。那么我们就要先认识了解转基因基因工程原理,来识别转基因,战争中使用到武器,那么你要先认识了解武器工作原理功能性能,才能使用武器与敌对进行战争,转基因中使用的质粒与美国基因武器基本原理是一样的,使用环状基因进行修改插入抗性基因,质粒在原理上好比子弹炮弹,通过介导载体农杆菌侵染植物体细胞基因好比射击子弹炮弹枪炮,所以认识质粒很重要
第六节
一.质粒载体不稳定性的类型
质粒的不稳定性(plasrnid
(1)结构的不稳定性
DNΑ的缺失、插入和重排都是造成质粒载体结构不稳定性的原因。
(2)分离的不稳定性
在细胞分裂过程中发生的质粒不平均的分配,也是导致质粒不稳定性的重要原因。我们将这种起因于质粒的缺陷性分配(defective
在细胞分裂过程中,质粒拷贝分配到子细胞的途径可分成主动分配(active
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其二是配对位点分配(pair-partition)机理,它认为只有一对质粒呈主动分配,其余的是随机分配。由于主动分配存在着有效的质粒拷贝数控制系统,从而保证了质粒的高度稳定性。
随机分配,它是指在细胞分裂过程中质粒拷贝数在两个子细胞之间是随机分配的[图4-17(b)]
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由此产生的分离频率(segregation
二.影响质粒载体稳定性的主要因素
(1)新陈代谢负荷对质粒载体稳定性的效应
含有质粒载体的寄主细胞重了代谢的负荷,降低了生长的速度。因此,尽管在细胞分裂过程中,因随机分配而产生无质粒载体细胞的机率相当低,但由于这些细胞生长速度快,经过初始的缓慢累积之后,最终便会取代具质粒载体的细胞,成为培养物中的优势群体。
(2)拷贝数差度对质粒载体稳定性的影响
不同细胞个体之间的质粒载体拷贝数的差异程度,简称差度(variance),可影响质粒载体丢失的速率,也是造成质粒载体不稳定性的原因之一。
具低差度分布(low
(3)寄主重组体系对质粒载体稳定性的效应
在野生型的大肠杆菌细胞中,质粒重组的重要结果是形成质粒寡聚体(plasmidoligomer),它同样是造成质粒载体不稳定性的原因之一。
决定大肠杆菌培养物中含质粒寡聚体细胞的比例有两种主要的因素:其一是质粒DNΑ分子间的重组频率,其二是含质粒寡聚体细胞的生长速率。重组的质粒二聚体一旦形成,便会以高出质粒单体分子两倍的速度进行复制,从而导致出现质粒寡聚体的克隆增殖,即所谓的二聚体灾难(dimer