• 一、转染方法
• 二、脂质体型转染
• 三、 适用细胞类型
• 四、转染前细胞培养
• 五、细胞培养用品

• 六、贴壁细胞转染程序
• 七、细胞转染程序
• 八、 共转染细胞程序
• 九、 siRNA 体内导入方法
• 十、技术文档

• 十一、技术视频

哺乳动物转染的常见方法有：磷酸钙共沉淀、电穿孔法、 DEAE- 葡聚糖和 polybrene 、机械法（例如 ， 显微注射和基因枪）、阳离子脂质体试剂，其中阳离子脂质体试剂转染法是目前最常用的转染方法。

(一) 注意事项

1. 转染试剂的用量
2. siRNA（小干扰RNA）的用量
3. 转染时的细胞密度
4. 转染时的操作顺序
5. 细胞与转染试剂 /siRNA（小干扰RNA）复合物的温浴的时间

(二) SiMi 转染试剂

选择最适合的转染试剂和转染条件，往往取决于不同的哺乳动物细胞类型和不同的核酸分子. SiMi Transfection Reagents 适用于核酸的体内和体外操作，可应用于 DNA 、 RNA 、反义寡核苷酸、 siRNA（小干扰RNA）的转染，也可应用于DNA/siRNA（小干扰RNA）的共转染操作；是一种新型的高效 siRNA 转染试剂。

(三) SiMi 应用领域

1. 原代培养细胞和转化细胞株的基因转染
2. siRNA（小干扰RNA）高通量转染试验
3. DNA 转染； DNA 和 siRNA（小干扰RNA）的共转染
4. 核酸（ siRNA 、 DNA 、 RNA ）的体内导入试验
5. 贴壁细胞和悬浮细胞转染

(四) SiMi 特点

1. 不必更换培养基，操作简便易行，可在半小时内完成操作
2. 在含血清培养基中也能表现高转染效率
3. 细胞毒性低；适用细胞广泛
4. 即用型试剂，可在含有抗生素的完全培养基中转染
5. 基于脂质的转染试剂，确保没有 RNAse 活性
6. 可介导 siRNA（小干扰RNA）高转染细胞及体内 siRNA（小干扰RNA）的高效导入

SiMi Transfection Reagents 转染试剂可广泛应用于多种细胞系的 DNA 和 siRNA（小干扰RNA）转染如： HeLa( 人颈部癌细胞 ) 、 MCF-7( 人乳房癌细胞 ) 、 Hep3B( 人肝细胞癌细胞 ) 、 COS-7( 猴肾细胞 ) 、 Neuro-2a( 鼠神经母细胞瘤细胞 ) 、 NIKS( 人角质化细胞 ) 、 B16( 鼠黑素瘤细胞 ) 、 DLD-1( 人结肠癌细胞 ) 、 NIH/3T3( 鼠胚胎成纤维细胞 ) 、 HT-29( 人结肠腺癌细胞 ) 、 A549( 人肺癌细胞 ) 、 CHO-k1( 仓鼠卵巢细胞 ) 和 293( 腺病毒 5 DNA 转化的人胚胎肾细胞 )，SVRbag4 细胞等。

在细胞板上培养细胞时，应使细胞汇合在 24 小时内达到 70-90%。

合适的 SiMi Transfection Reagents 用量

合适的 siRNA（小干扰RNA）(DNA) ： lipofetamin2000 比例对核酸的高效转染有重要影响；我们推荐的 DNA ： lipofetamin2000 为 1 ： 0.5 — 1 ： 5 （ ug:ul ）， siRNA（小干扰RNA）： SiMi Transfection Reagents 为 1 ： 0.01-1 ： 0.1 （ pmol ： ul ）一般情况下，此范围内都可获得高的转染效率。

选用生理状态良好的细胞对提高转染效率很重要. siRNA(DNA) 和 SiMi Transfection Reagents 的用量和两者的比例可在推荐范围内适当调整。

1. 转染前一天， 104 ′ 4-5 细胞接种在 24 孔板上， 0.5mL 含 FBS 和抗生素的 DMEM （或 Opti-MEM ，其他培养基）细胞培养基。
2. 选择用于初期接种的细胞数量，应能在 24 小时内使细胞汇合达到 70-90% 。
3. 在 50 μl 的 DMEM （或 Opti-MEM ，或其他无血清培养基）无血清培养基加入 20pmol siRNA( 或 0.8 μ g DNA) ，柔和混匀；
4. 混匀 SiMi Transfection Reagents 试剂，用 50 μl 无血清的 DMEM 或 Opti-MEM ，或其他无血清培养基）稀释 1 μl SiMi Transfection Reagents 试剂（ DNA 转染时，则加入 2 μlSiMi Transfection Reagents 试剂），轻轻混匀，室温放置 5 分钟；
5. 将稀释好的 siRNA（小干扰RNA）和 SiMi Transfection Reagents 试剂混合；轻柔混匀，室温放置 20 分钟 ， 以便形成 siRNA/SiMi Transfection Reagents （或 DNA/SiMi Transfection Reagents ）复合物。
6. 将 100 μl siRNA/SiMi Transfection Reagents （或 DNA/SiMi Transfection Reagents ）复合物加到含有细胞和培养基的培养板的孔中，来回轻柔摇晃细胞培养板板。
7. 细胞在 CO2 培养箱中 37 ℃温育 24h-48h 后，进行转染后的其它检测步骤.如果细胞株比较敏感，孵育 4-6 小时后，除去复合物，更换培养基。

1. 转染的当天，收集细胞离心，用含 FBS 的培养基重悬。
2. 在 50 μl 的 DMEM （或 Opti-MEM ，或其他无血清培养基）无血清的培养基加入 20pmol siRNA( 或 0.8 μ g DNA) ，柔和混匀；
3. 混匀 SiMi Transfection Reagents 试剂，用 50 μl 无血清的 DMEM 或 Opti-MEM ，或其他无血清培养基）稀释 1 μl SiMi Transfection Reagents 试剂（ DNA 转染时，则加入 2 μl SiMi Transfection Reagents 试剂），轻轻混匀，室温放置 5 分钟；
4. 将稀释好的 siRNA（小干扰RNA）和 SiMi Transfection Reagents 试剂混合；轻柔混匀，室温放置 20 分钟 ， 以便形成 siRNA/SiMi Transfection Reagents （或 DNA/SiMi Transfection Reagents ）复合物。
5. 再加入 400 μl 细胞悬浮液（细胞数量决定于细胞类型和转染后分析测试的时间）。
6. 细胞在 CO2 培养箱中 37 ℃温育 24h-48h 后，进行转染后的其它检测步骤.如果细胞株比较敏感，孵育 4-6 小时后，除去复合物，更换培养基。

1. 在转染的前一天， 104 ′ 4-5 细胞接种在 24 孔板上， 0.5 mL 含 FBS 和抗生素的细胞培养基。
2. 选择用于初期接种的细胞密度，应能在 24 小时内使细胞汇合达到 70-90% 。
3. 在 100 μl 的无血清的培养基中稀释 20pmol siRNA（小干扰RNA）和 0.2 μ g DNA ，加入 2 μl SiMi Transfection Reagents 试剂，充分混合，放置 20 分钟 ， 以便形成 siRNA（小干扰RNA）/ DNA/SiMi Transfection Reagents 复合物。
4. 将 siRNA（小干扰RNA）/ DNA/SiMi Transfection Reagents 复合物加入培养基中，轻轻混匀。
5. 细胞在 37 ℃温育 24h-48h 后，进行转染后的其它步骤。

1. 适量的 siRNA 或 DNA 溶于不含 RNA 酶的无菌水中，轻轻混匀，因为注射液体积有限，建议采用高浓度的 siRNA 或 DNA ，一般 DNA 为 2 μ g / μl 、 siRNA 为 10 μ g / μl。
2. 取适量的 DNA 、 siRNA 或 siRNADNA 复合物与 SiMi Transfection Reagents 混合.例如，在 1# 管中加入 0.5 μl 的 DNA （ 1 μ g ）和 0.5 μl 的 siRNA （ 5 μ g ），在 2# 管中加入 0.55 μl 的 SiMi Transfection Reagents （ 24 μ g ）和 0.45 μl 不含 RNA 酶的无菌水中，将 1# 管中的溶液加入 2# 管中，在室温下温育 30 分钟，以形成 siRNA/DNA-SiMi Transfection Reagents 复合物。
3. 制备的 siRNA/DNA-SiMi Transfection Reagentse 复合物可用于体内导入 siRNA 、 DNA 或 siRNADNA 。