【转载】细胞培养问题:防止微生物污染、细胞出现空气泡

标签:
杂交瘤技术 |
分类: 抗体文章 |
细胞中出现空气泡
细胞出现空泡的原因很多,可以归结为细胞老化和衣原体感染两个主要原因。
1,细胞老化。
原代细胞培养的过程中经常出现这样的情况,是有些细胞处于终末分化状态,不会再分裂,时间长了就会空泡化而死亡。传代细胞出现这种状况比较少见,可能的原因是细胞代龄较长,老化严重。
2,衣原体感染。
一旦一些细胞出现空泡化,继续培养,空泡范围会扩大,即使传代后也如此,出现这种情况,细胞基本无法挽救。后来检测发现,此种细胞存在衣原体的感染。衣原体广泛寄生于人、哺乳动物(mammal;mammalian)及禽类。
衣原体有其独特的生活周期,种间无差异。原体在宿主细胞外较为稳定,但具有高度的感染性。当与易感细胞接触时,以吞饮的方式进入细胞内,由宿主细胞膜包围原体而形成空泡,在空泡内的原体增大,发育成为始体。始体在空泡以二分裂形式繁殖,在空泡内形成众多的子代原体,构成各种形态的包涵体。包涵体的形态、在细胞内存在的位置、染色性等特征,有鉴别衣原体的意义。成熟的子代原体从宿主细胞释放出来,再感染其他的宿主细胞,开始新的发育周期。每个发育周期约需40小时。始体是衣原体周期中的繁殖型,而不具有感染性。
防止微生物污染
1,细菌和霉菌污染,等到培养基变浑浊,已经太迟了。
2,当微生物污染较轻时,微生物和细胞可以共生长,细胞仍然长得好好的。
3,防止细胞的微生物污染,要做好消毒灭菌,包括培养箱的消毒灭菌,不能抱有侥幸心理,在这方面不要一味地为了省钱省时省力,要早发现早处理早抢救。
4,及时换液,保持培养液的相对干净状态,就不容易让微生物滋生。
5,及时冻存没问题的细胞,是防止细胞微生物污染的第二保障。
6,倒置显微镜下可以发现的微生物污染,主要是形态异常十分明显的微生物污染,比如链球菌和念珠菌的一串串、细胞之间背景的泥沙样改变,应注意与生长状态欠佳的细胞及细胞碎片鉴别。若倒置显微镜下没发现明显微生物污染,但存在可疑,只能通过特异的检测手段来排除。
http://s5/bmiddle/002zjnA7zy7hPjIl6Fm14&690
http://s11/mw690/002zjnA7zy7hPjLXPwCaa&690
http://s3/mw690/002zjnA7zy7hPjNy1Oy22&690
http://s10/mw690/002zjnA7zy7hPjOUSXT99&690
7,常规用双抗预防,但是双抗不能抗支原体、衣原体、病毒等微生物,只能抗大多数细菌(青霉素主要抗革兰氏阳性菌,而链霉素能抗阴性菌),这是其局限性。况且抗生素对细胞也是有影响的,在做药理实验时最好连抗生素也不要加。必要时用到支原体清除剂等产品进行细胞的抢救。
http://s10/mw690/002zjnA7zy7hPjQ0XWN49&690
相关文章:杂交瘤制备单克隆抗体流程