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离心操作要点

(2012-09-18 19:16:41)
标签:

速率区

上清液

冷冻离心机

驱动电机

文化

分类: 现代生物学实验技术

    实验室常用电动离心机有低速、高速离心机和低速、高速冷冻离心机,以及超速分析、制备冷冻离心机等多种型号。

    其中以低速(包括大容量)离心机和高速冷冻离心机应用最为广泛,是生化实验室用来分离制备生物大分子必不可少的重要工具。低速离心机其转速一般不超过4000rpm,台式高速离心机最大转速可达18000rpm

    在实验过程中,欲使沉淀与母液分开,常使用过滤和离心两种方法。但在下述情况下,使用离心方法效果较好。

    ①沉淀有粘性或母液粘稠。②沉淀颗粒小,容易透过滤纸。③沉淀量过多而疏松。④沉淀量很少,需要定量测定。或母液量很少,分离时应减少损失。⑤沉淀和母液必须迅速分开。⑥一般胶体溶液。

    离心分离的几种方法

    制备型离心机的几种分离方法:

    A.差速离心

    逐次增加离心力,每次可沉降样品溶液中的一些组份。

    差速离心是一种最常用的方法。在这种方法中,离心管在开始时装满了均一的样品溶液。通过在一定速度下一定时间的离心后,就可得到两个部分:沉淀和上清液。

    通常在第一次离心时把大部分不需要的大粒子沉降去掉。这时所需的组份大部分仍留在上清液中。然后将收集到得上清液可以进行一步的离心,把所需的粒子沉积下来。

    离心的时间要选择得当,使大部分不需要的更小的粒子仍留在上清液中。对于得到的沉淀和上清液可以进行一步的离心,直到达到所需要的分离纯度为止。

    差速离心的特点是操作简单,但分离纯度不高。

    B.密度梯度离心法

    可以同时使样品中几个或全部组份分离,具有很好的分辨率。

    1)速率区带法(rate zonal):

    根据样品中不同粒子所具有的不同的尺寸大小及沉降速度(S)。大致步骤如下:

    在离心管中装入密度梯度溶液,溶液的密度从离心管顶部至底部逐渐增加(正梯度)。

    将所需分离的样品小心地加至密度梯度溶液的顶部。

    由于不同大小的粒子在离心力作用下,在梯度中移动的速度不一样,所以经过离心后会形成几条分开的样品区带。

    注意:样品粒子的密度必须大于梯度液注中任一点的密度。离心过程必须在区带到达管子底部前停止。

    2)等密度离心法(isopycnic):

    根据粒子的不同密度来分离。离心过程中,粒子会移至与它本身密度相同的地方形成区带。密度的选择要使梯度的范围包括所有待分离粒子的密度。样品可以停留在等密度液那里。经离心后,不同的样品粒子达到它们各自的平衡点。注意:平衡后粒子的分离完全由其密度决定,与时间无关。此时再改变离心转速,只能改变区带的相对位置。

离心操作要点

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

    1.电动离心机的基本结构和性能

    ①普通(非冷冻)离心机

    这类离心机结构较简单,可分小型台式和落地式两类,配有驱动电机、调速器、定时器等装置,操作方便。低速离心机其转速一般不超过4000rpm,台式高速离心机最大转速可达18000rpm

    ②低速冷冻离心机

    转速一般不超过4000rpm,最大容量为2—4L,是实验室最常用于大量初级分离提取生物大分子、沉淀物等。其转头多用铝合金制的甩平式或角式两种,离心管有硬质玻璃、聚乙烯硬塑料和不锈钢管多种型号。离心机装配有驱动电机、定时器、调整器(速度指示)和制冷系统(温度可调范围为-20—+40℃),可根据离心物质所需,更换不同容量和不同型号转速的转头

    ③高速冷冻离心机

    转速可达20000rpm以上,除具有低速冷冻离心机的性能和结构外,高速离心机所用角式转头均用碳纤维、钛合金或铝合金制成。离心管为具盖聚乙烯硬塑料制品。这类离心机多用于收集微生物、细胞碎片、细胞、大的细胞器、硫酸沉淀物以及免疫沉淀物等。

    ④超速离心机

    转速可达50000rpm以上,能使亚细胞器分级分离,并用于蛋白质、核酸分子量的测定等。其转头为高强度钛合金制成,可根据需要更换不同容量和不同型号的转速转头。

    超速离心机驱动电机有两种,一种为调频电机直接升速,另一种为通过变速齿轮箱升速。为了防止驱动电机在高速运转中产热,装有冷却驱动电机系统(风冷、水冷),限速器、记时器、转速记录器等。此外,超速离心机还装配有抽真空系统。

 

    注意事项

①离心机要放在平坦和结实的地面或实验台上,不允许倾斜。

②离心机应接地线,以确保安全。

③离心机启动后,如有不正常的噪音及振动时,可能离心管破碎或相对位置上的两管重量不平衡,应立即关机处理。

④须平稳、缓慢增减转速。关闭电源后,要等候离心机自动停止。不允许用手或其他物件迫使离心机停转。

 离心操作要点

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

  

    使用离心机时不可超过离心机或转子的最高转速

    所用转速绝对不能超过转子的限定,最高转速通常写在转子上面,例如TGL-20M的最高转速为20,000rpm,但若离心机太老旧,必须往下调降。

转子的最高转速

    在下述情况下要降低转子的最高转速

    转子的运转时间和运转次数达到规定的寿命时。当转子受到局部表面损伤或出现管孔内轻微腐蚀时。使用不锈钢离心管、套管、厚壁管或离心瓶时。样品平均密度超过1 2gcm3时。

 

    离心转子的种类很多,形状不一, 对于彼此之间离心半径的换算比较麻烦,为此提出了离心转头的K因素法,使各种离心转子间的换算简化。

    将沉降系数进行微分得,S=dlnxl /w2t.通常离心沉降由最小半径a到最大半径b, 则S=In(b/a)/W 2dt,设1n(b/a)/W2=K,T=dt,得  S=K/T

    由上式可以算出每种转子在不同转速时的K值,列成一个K值表。

    实验时如需要改变离心转速,只要查出相应的转速的K值,然后根据S=K/T,就可以算出改变转速后应该离心的时间。

    如原来选用转速成的K值为K .其离心时间T1,今要改用另一转速离心,只须由表中查出其相应K值,如K 2。由于样品的沉降系数S是一定的,故有S=K1/T1=K 2/T 2可以算出K2时的T 2, 从上式可以看出,对于同类转子,其K值反映了转子的离心能力,K值越小,离心能力越大,离心时间越短, 转子使用价值越高。

离心操作要点

    离心管可由许多种不同材料制成, 如聚乙烯(PE)、纤维素(CAB)、聚碳酸脂(PC)、聚丙烯(PP)等。各种离心管的拉力强度和伸长度都不同, 应按需要选用。注意保证样品、溶剂及梯度材料不腐蚀离心管及盖组件过期、老化、有裂纹或已受腐蚀的离心管尽量不用或降速使用,控制塑料离心管的使用次数,注意规格配套。离心过程中不得不开启离心室盖,不得用手或异物碰撞正在旋转中的转子及离心管。

 

    低温离心样品应先将空的转子2000rmin预冷一定时间,预冷时控制温度在0左右,也可将转子放在冰箱中预冷数小时备用,离心杯可直接存放在冰箱中预冷。

离心操作要点

离心操作要点

离心操作要点

离心操作要点

离心操作要点铝合金转子,碳纤维转子

 

一个离心机,可以配一组转子,每个转子的最大转速一样吗?
离心操作要点

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

这个转子的最大转速是多少?这个转子的最大允许转速是多少?
离心操作要点
离心管的盖子根,应该朝向哪里?

该转子最大转速是多少?该转子最大允许转速是多少?

离心操作要点

离心操作要点

离心操作要点

 

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