酵母感受态制备（LiAc法）

活化AH109 Gold 划线于YPDA平板上，30℃倒置培养（约3天）（酵母在4℃YPDA平板上保存一个月）。

准备：YPDA液体培养基，100ml三角瓶2个，250ml三角瓶1个，50ml离心管4个，15ml离心管2个，1.1xTE/LiAc 溶液。

溶液：1.1xTE/LiAc 溶液（现配现用）

1.1ml 10xTE+1.1ml 1M LiAc+7.8ml无菌水。总10ml。

步骤：

1、挑取单菌落（小于4周，半径2-3mm）到3mlYDPA中。

2、30℃摇菌8h。

3、接5微升到50mlYPDA液体培养基中。（此处为了防止OD摇过了，我一般是两个50ml培养基，一个接5微升，一个接10微升，以10微升的检测OD值）

4、30℃ 230-250rpm，16-20h，OD600达到0.15-0.3。

5、700g,RT离心5min。

6、弃上清，用100mlYPDA重悬。

7、30℃， 3-5h，OD600达到0.4-0.5。

8、700g，RT离心，5min。

9、弃上清，60ml无菌水重悬。

10、700g,RT离心5min。

11、弃上清，3ml，1.1xTE/LiAc重悬。

12、分装到1.5mlEP管中。

13、12000rpm离心15s。

14、弃上清，600微升1.1xTE/LiAc重悬。