富田兴合苑业主的大事小事63、新型冠状病毒63：染色实验中，微生物是死了，还是活着？

革兰氏染色反应：是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gram创立的。细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（用“G+”表示，“G+”读做“革加”或“革阳”），后者为革兰氏阴性菌（用“G-”表示，“G-”读做“革减”或“革阴”）。为观察方便，脱色后再用一种红色染料（如碱性蕃红等）进行复染。阳性菌仍带蓝紫色，阴性菌则被染上红色。

革兰氏染色法（Gram stain）能观察到细菌的形态…

…碱、碱性、染、料、染料、结、晶、结晶、媒、媒染：见《富田兴合苑业主的大事小事62》…

…

革兰氏染色实验中，微生物固定后是死了，还是活着？——网友提问

“当然是死了，”网友“鬼哥1231”说，“制作图片的时候因为要固定，玻片会经过酒精灯外焰，那有几百度。再厉害的生物在这个温度下也难逃一死…”

资料：染色标本的检查

通过对标本的涂片及染色，能观察细菌的形态、大小、排列、染色特性，以及荚膜、鞭毛、芽孢、异染颗粒等结构，有助于细菌的初步识别或诊断。

…荚膜：见《富田兴合苑业主的大事小事47》…

…鞭毛：见《富田兴合苑业主的大事小事60》…

…芽孢：见《富田兴合苑业主的大事小事44》…

1、涂片

从肉汤增菌液、半固体斜面或平板上挑取菌液、菌苔或菌落，滴加1小滴菌液于洁净玻片上，稍加涂散。或先加1小滴生理盐水于玻片上，将挑取的菌苔或菌落均匀涂布于盐水中。多个标本可在同一张玻片制作涂片（如图所示）。有的细菌培养物在玻片上不易黏附，常需加入少量无菌血清一起涂片。涂片的厚度要适当，以菌液呈均匀、半透明为宜。临床标本如脓、痰、分泌物等可直接涂片。

2、固定

涂片自然干燥后，在火焰上迅速通过3次，加热固定（温度不可过高）。固定的目的一是杀死细菌，使染料易于着色；二是使细菌附着于玻片上，不易被水冲掉。

3、染色

染色液多为水溶液，一般用低浓度染色液（＜10g/L）为好，滴加染色液覆盖涂膜。染色分单染和复染两种方法。为了促使染料与菌体结合，有的染液中需加入酚（fn）、明矾（fán）或碘（din）液，起到媒染作用，也可加热促进着色。

…酚：由氢氧基（-OH）与芳香环（苯环）直接相连而成的化合物总称。大多数为无色晶体，难溶于水。见《富田兴合苑业主的大事小事6》…

…矾、碘：见《富田兴合苑业主的大事小事62》…

4、脱色

醇类、丙酮（tóng）、氯仿[三氯甲烷（CHCl3）]是常用的脱色剂。酸类可作为碱性染料的脱色剂，而碱类可作为酸性染料的脱色剂。无机酸的脱色能力大于有机酸。乙醇是常用的脱色剂。95%乙醇常用于革兰染色法。

革兰氏染色后细菌是否已死亡？——网友提问

“肯定死了。
首先经过火焰固定，已经烧得有点烫了。
结晶紫、碘液、酒精都是杀菌的试剂。染液还渗透进细胞壁了，还能活？…”匿（nì）名网友说。

…匿：形声。从匚（x），若声（上古读音与匿声相近）。“匚”表示有所藏。本义：隐藏，躲藏…

[…形声：一种造字法…是说字由“形”和“声”两部分合成，形旁和全字的意义有关，声旁和全字的读音有关。如由形旁“氵（水）”和声旁“工、可”分别合成“江、河”…]

…匿：隐藏；不让人知道：隐～。～名。～居深山。～影藏形…

微生物经固定后，是死了还是活的？——网友提问

“1.理论上讲，生物组织固定后短时间内是不会发生变化的，也就是说组织细胞原来什么样固定后还什么样。

2.如何判定组织固定好与不好，跟不同的样品厚度、固定液、固定温度、环境湿度都是有关系的。通常用固定时间来判断，例如FAA固定液固定12小时一般都可以被视为固定。有一点是通用的，短时间固定后要判断组织是否固定，可以用染料染。如果还染不上，一般都是没有固定好的，因为细胞没有死亡，细胞在主动拒斥染料分子进入。

3.固定是组织切片的根本，如果固定不好,组织切片就可能产生各种畸变或者不着色等现象…”匿名网友说。

追问：肝脏固定好以后会是什么颜色，是有红色变白吗？

回答：肝脏等器官的有色组织，固定后颜色会变浅，深红变成浅红色，就像炒得半熟一样。当然，这里讲的是用FAA的固定。同时镜检后只要细胞核没有畸变，细胞饱和圆润就可以判断是已经固定好了的。

…FAA：formalin（福尔马林）、acetic acid（冰醋酸）、alcohol（酒精）的首字母缩写…

…FAA固定液：又称标准固定液或是固定液。适用于一般根、茎、叶、花药、子房组织切片。在植物形态解剖研究上应用极广。此固定液最大优点是兼有保存剂作用，但对染色体的观察效果较差。本试剂成分为5%的福尔马林，5%的冰醋酸，90%的70%乙醇（酒精）。

操作说明：将植物组织取下后用水冲洗干净，然后放入FAA固定液中，较大的组织需要切成小块再固定。一般在FAA固定液中固定24h以上。较小或者幼嫩组织可根据材料大小适当减少时间…

“还有假阴性、假阳性等相当复杂的情况，要根据每个人的具体情况分别判断。而相当多的人总以为“阴性”要比“阳性”好，这是一种误解…

请看下集《富田兴合苑业主的大事小事64、新型冠状病毒64：体检报告中的阴性与阳性…》”

若不知晓历史，便看不清未来

欢迎关注搜狐号“人性的游戏”