富田兴合苑业主的大事小事62、新型冠状病毒62：革兰氏染色反应，碱性染料结晶，媒染

革兰氏染色反应：是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gram创立的。细菌先经碱性染料结晶染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌此色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（用“G+”表示，“G+”读做“革加”或“革阳”），后者为革兰氏阴性菌（用“G-”表示，“G-”读做“革减”或“革阴”）。为观察方便，脱色后再用一种红色染料（如碱性蕃红等）进行复染。阳性菌仍带蓝紫色，阴性菌则被染上红色。

革兰氏染色法（Gram stain）能观察到细菌的形态…

…碱（无机化合物）：在酸碱电离理论中，碱指在水溶液中电离出的阴离子全部都是OH-（氢氧根）的物质；在酸碱电子理论中，碱指电子给予体（化学反应中失去电子的一方）…

…碱性：一种物质在溶剂中向其它物质提供未共用电子对（电子；负电荷）的能力…

…染：形声。从水，杂声。一说从木、从水、从九。会意。古染料多来源于植物，故从木；染料须加工成液体，故从水；染须反复进行，故从九。本义：使布帛等物着色…

…料：会意。从斗，从米，表示用斗量米。本义：称量…

…料2：材料；原料：木～。燃～。布～。加～。资～。他就是这么块～…

…染料：指能使其他物质获得鲜明而牢固色泽的一类有机化合物，由于现在使用的颜料都是人工合成的，所以也称为合成染料。染料和颜料一般都是自身有颜色，并能以分子状态或分散状态使其他物质获得鲜明和牢固色泽的化合物（百度百科）；直接或经媒染剂作用而能附着在纤维和其他材料上的有色物质，有的可以跟被染物质化合。种类很多，以有机化合物为主（百度汉语）…

…结（ji）：长出（果实或种子）…

…晶：会意字。甲骨文字形，从三日，表示光亮之意。本义：光亮，明亮…

（…会意：造字法之一。会意是说字的整体的意义由部分的意义合成，如“信”字。“人言为信”，“信”字由“人”字和“言”字合成，表示人说的话有信用…）

…晶2：1.光亮：～莹。亮～～。2.水晶：茶～。墨～。3.指晶体：结～…

…结晶：热的饱和溶液冷却后溶质因溶解度降低导致溶液过饱和，从而溶质以晶体的形式析出，这一过程叫结晶。

晶体，即原子、离子或分子按一定的空间次序排列而形成的固体…

…媒：形声。从女，某声。本义：婚姻介绍人，媒人…

…媒染：利用载体使对纤维没有亲和力的染料色素染上纤维。这种载体称媒染剂。我国古代常用的媒染剂有白矾[茜（qiàn）草染红]和涅（矿物染黑）等…

…矾（fán）：某些金属硫酸盐的含水复盐结晶，如明矾、胆矾、绿矾。明矾也叫“白矾”，带涩味，呈酸性反应，可供造纸、制革及制颜料、染料等用…

[…硫酸：无机酸，化学式H₂SO₄。强酸性。纯品为无色油状液体，具有强烈的吸水性和腐蚀性，有氧化性。能损伤衣物、皮肤。在配制溶液时，切忌加水入酸，必须将酸缓滴入水中。广泛用于石油、化工、冶金等工业中…

…盐：1.电离时生成金属阳离子（或其他阳离子）和酸根阴离子。通常是由金属阳离子和酸根阴离子结合的化合物。如硝酸钠（NaNO3）、硫酸铵［（NH4）2SO4］等。2.食盐的通称…

…复盐：见《富田兴合苑业主的大事小事51》…]

…涅（niè）：形声。从水，从土，曰声。本义：可做黑色染料的矾石…

[…形声：一种造字法…是说字由“形”和“声”两部分合成，形旁和全字的意义有关，声旁和全字的读音有关。如由形旁“氵（水）”和声旁“工、可”分别合成“江、河”…]

…媒染：以化学品处理某物，从而给予后者以与染料结合的能力…

格兰氏染色中碘液的作用？——网友提问

格兰氏染色流程可概括为：染色-脱色-复染。
第一步初染剂（Primary Stain）：使用结晶紫染色。
第二步媒染剂（Mordant）：加入复方碘溶液或称革兰氏碘液（Gram's Iodine）后会形成不溶性的结晶紫-碘（CV-I）复合体。细菌呈紫黑色。

第二步是关键，它的目的是分辨细菌的革兰氏染色特性。

若为革兰氏阳性菌，此复合体系结合于细胞壁之镁、核糖核酸组成（Magnesium Ribonucletic Acid），形成镁-核糖核酸-结晶紫-碘（Mg-RNA-CV-I）复合体，不易脱去。

（…碘：非金属元素，符号I，原子序数53，最外层电子数7…）
第三步脱色剂（Decoloring Agent）：使用酒精（95%）脱色，试剂具脂溶剂（Lipid Solvent）和蛋白脱水剂（Protein Dehydrating Agent）之双重功能。此步骤对革兰氏阳性细菌无效，因为细胞壁上厚厚的细胞壁层阻隔了结晶紫-碘复合体的外渗，只能留在细菌体内。革兰氏阴性菌细胞壁层薄，会被脱色而成为无色。
第四步复染剂（Counterstain）：为了对比，在此之后会加入番红（Safranin）进行复染，革兰氏阴性菌成红色，而革兰氏阳性菌仍保有原来的紫色。（优质解答）

革兰氏染色的关键步骤是碘液媒染还是酒精脱色？——网友提问

“都重要啊，酒精脱色不好会假阳性，碘液煤染不好的话结晶紫结合不好吧…”网友“李云龙（备注是‘微生物学博士’）”说。

“革兰氏染色四大基本步骤：
结晶紫初染
碘液媒染
乙醇脱色
沙黄复染
其中乙醇脱色是关键
因为如果脱色过度，有可能会使革兰氏阴性菌呈假阴性
如果脱色不够，有可能使革兰氏阴性菌呈假阳性…”知乎网友说。

“这个实验出现假阳性主要是由于脱色不完全，可能是由于涂片过厚，或者是结晶紫染色过度，导致脱色不完全。

假阴性可能是因为细胞固定过度，造成细胞壁通透性的改变，而出现假阴性结果；细胞培养时间太长，可能已经有部分细胞发生死亡或者自溶，也导致细胞壁通透性的改变而出现假阴性结果。

因此染色、脱色、固定等步骤的时间控制比较重要，需要对比试验，得出最适时间…”网友“一粒沙（备注是‘一粒做实验的沙子’）”说。

“革兰氏染色实验中，微生物固定后是死了，还是活着？——网友提问

“当然是死了，”网友“鬼哥1231”说，“制作图片的时候因为要固定，玻片会经过酒精灯外焰，那有几百度。再厉害的生物在这个温度下也难逃一死…”

请看下集《富田兴合苑业主的大事小事63、新型冠状病毒63：染色实验中，微生物是死了，还是活着？》”

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