这次，酶切后的质粒，乙醇沉淀，加了1u 20mg/ml的糖原，结果得率只有10%。

以前用同样的方法，不加糖原，得率在70%以上。为什么这次不行了呢？

2012.1.19-20比较了新配其autoclave的 NaAc（1），old NaAc without autoclave（2）, and autoclaved old NaAc（3）. 新的产量是老的两倍。但是，老的NaAc autoclave后没有改善，反而是没有autoclave的产量高一点。结论：NaAc变质了。离心后，白色沉淀量，1是2和3的大概两到三倍。但是，所有的都能看到白色沉淀。而前一次，glycogen是加了2和酒精-80度过夜，然后离心，再加glycogen，再离心，看不到白色沉淀。莫非DNA和糖原结合后，既可以抵抗DNA酶，也可以抵抗糖原酶？这次是-20度过夜的。用2接种了一个plate，一天后无菌落生长。

同时把上一次得率只有10%的所有DNA PCI抽提，重新用1，酒精沉淀。结果，原来的总量是130X25，现在居然变成了660X15，增加了两倍！最可能的解释是当时DNA浓度测定不对。为什么呢？很可能是加了水之后室温下溶解的时间不够。以前好像是用60度十分钟，效果不错，或者室温下30分钟。今后就用60度十分钟吧。

失败的关键：
1. 过期试剂。是不是因为没有autoclave才变质了呢？
2. 加水溶解时间不够。60度十分钟，或者室温下30分钟才行。

2012.1.17
pBS-Upd3 Acc651, 1/10 Na Acetate, 2.5X ETOH, incubate at-80C ON. Spin 16000g 15min 4C. Added 2ul  of glycogen, 70%ETOH, Spin 5min at 4C. Dissolve at RT for 10min?.Yield: 10%. It should be about 40% based on the amount of DNA get from it from the next ethanol precipitation.

2011.9.18
pBS-Upd3 BamH1 and Bste II. 1/10 Na Acetate, 3X ETOH, incubate on ice 15min. Spin 18000g 15min 4C. 70%ETOH, Spin 5min. Dissolve at 37C for 30min.Yield: 25% and 34% respecitively. P723

2011.9.15
pBS-GR51, 1/10V Na Acetate, 2.5X ETOH, incubate on ice 25min. Spin 18000g 15min 4C. 70%ETOH, Spin 5min. Dissolve at RT for 30min. Yield: 50%. P715

2011.8.13
pBS-GR51, BamH1 and Hind III,  1/10V Na Acetate, 3X ETOH, incubate -20C ON, Spin 18000g 30min or 50min at 4C. 70%ETOH, Spin 20min. White pellet can be seen for BamHI but not hind III ( bam HI is 600ul while hind III is only 200ul) Dissolve for 10min at 60C Yield:unkown.

2011.8.12
pBS-GR51, BamH1 and HindIII. 1/10V Na Acetate, 3X ETOH, incubate on ice 3h. Spin 18000g 30min 4C. 70%ETOH, Spin 15min. Small white pellet can be seen. Dissolve for 10min(RT? probably 60C) Yield:70%.P681