加载中…10X PBS recipe总结
(2011-06-05 05:27:10)
标签：
杂谈 |
分类： Protocol |
500毫升：
Dissolve the following chemicals in 200-300 ml of dH2O:
40g of NaCl
1.0g of KCl
13.6g of Na2HPO4.7H2O OR 7.2g of Na2HPO4（heat to dissolve)
1.2g of KH2PO4
Ajust volume to 500ml, don't need to adjust the PH. Autoclave.
To make 1X PBS: 50ml 10X PBS +450ml of dH2O, don't need to autoclave.
To make 1X PBST: 500ml of 1X PBS +0.5ml Tween 20, cannot be autoclaved, otherwise, white pellet will form.
补充：为了提高效率和质量，有以下几种方法：
1. PBS片剂，将几种化合物混合，一片溶解到一定容量的蒸馏水即成PBS。Invitrogen 100 tablets, price: 47 dollars. Each tablets can be used to make 100ml of 1X PBS.价格和10X PBS差不多。
2. 公司购买瓶装PBS。Invitrogen的10X PBS 500ml 31刀，1L 50刀。 1X PBS 1L价格大约是27刀一瓶。
将来我的实验室应该尽量从公司购买PBS，DEPC Water等以提高效率。
注意事项：
1. Na2HPO4.7H2O常温下难以溶解，因为不需要调节PH，所以加热溶解即可。一开始用200-300毫升而不用400毫升，是因为加热后，加入冷水可以快速冷却。否则，要等很久才可以把烧杯中的溶液倒入量筒。
2. Autoclave的时候很容易选择unwrapped的模式，应该选择liquid模式。
3. 关于PH的调节：网上很多protocol说10X的PBS应该调节PH到7.4再autoclave，导师说不用调节。查阅了《分子克隆》第二版和第三版（中文版），都没找到10X PBS的recipe。我们这里用的Milli-Q WaterPH是7.6，而从理论上说，纯净的蒸馏水PH是7.0，因为会溶解空气中的二氧化碳，PH会低于7.0.可能我们的Milli-Q water有杂质。按照上面的recipe配置的10X PBS不调节PH值时，PH值为7.1，加水稀释为1X PBS后PH值为7.5. 而PBS的正常PH值范围应该是7.2-7.4, 7.5应该也问题不大。
可是，难道网上的recipe错了吗？我查了invitrogen公司出售的10X PBS，PH值也是7.4. 如果用我们的水稀释，PH值就会达到7.7-7.8， 看来，也许是我们的水有问题。
4. 如果一次配置两种及以上溶液，不要把recipe写在一张纸上，否则容易混淆。
Dissolve the following chemicals in 200-300 ml of dH2O:
40g of NaCl
1.0g of KCl
13.6g of Na2HPO4.7H2O OR 7.2g of Na2HPO4（heat to dissolve)
1.2g of KH2PO4
Ajust volume to 500ml, don't need to adjust the PH. Autoclave.
To make 1X PBS: 50ml 10X PBS +450ml of dH2O, don't need to autoclave.
To make 1X PBST: 500ml of 1X PBS +0.5ml Tween 20, cannot be autoclaved, otherwise, white pellet will form.
补充：为了提高效率和质量，有以下几种方法：
1. PBS片剂，将几种化合物混合，一片溶解到一定容量的蒸馏水即成PBS。Invitrogen 100 tablets, price: 47 dollars. Each tablets can be used to make 100ml of 1X PBS.价格和10X PBS差不多。
2. 公司购买瓶装PBS。Invitrogen的10X PBS 500ml 31刀，1L 50刀。 1X PBS 1L价格大约是27刀一瓶。
将来我的实验室应该尽量从公司购买PBS，DEPC Water等以提高效率。
注意事项：
1. Na2HPO4.7H2O常温下难以溶解，因为不需要调节PH，所以加热溶解即可。一开始用200-300毫升而不用400毫升，是因为加热后，加入冷水可以快速冷却。否则，要等很久才可以把烧杯中的溶液倒入量筒。
2. Autoclave的时候很容易选择unwrapped的模式，应该选择liquid模式。
3. 关于PH的调节：网上很多protocol说10X的PBS应该调节PH到7.4再autoclave，导师说不用调节。查阅了《分子克隆》第二版和第三版（中文版），都没找到10X PBS的recipe。我们这里用的Milli-Q WaterPH是7.6，而从理论上说，纯净的蒸馏水PH是7.0，因为会溶解空气中的二氧化碳，PH会低于7.0.可能我们的Milli-Q water有杂质。按照上面的recipe配置的10X PBS不调节PH值时，PH值为7.1，加水稀释为1X PBS后PH值为7.5. 而PBS的正常PH值范围应该是7.2-7.4, 7.5应该也问题不大。
可是，难道网上的recipe错了吗？我查了invitrogen公司出售的10X PBS，PH值也是7.4. 如果用我们的水稀释，PH值就会达到7.7-7.8， 看来，也许是我们的水有问题。
4. 如果一次配置两种及以上溶液，不要把recipe写在一张纸上，否则容易混淆。
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