nanodrop总结
(2011-06-04 00:35:46)分类: 科研总结 |
如果是纯净的DNA和RNA,NanoDrop可以区分:DNA,A260/280约等于1.8,而RNA约等于2. 但是因为不确定测的样品是否纯净,所以NanoDrop不能区分DNA, RNA和单核苷酸。
260: 核酸(包括DNA和RNA)
280: 蛋白
230: 盐离子(酚盐,硫酸盐)及其他有机化合物如多糖
310: 背景吸收值
OD260/OD280:估计蛋白质的残留(必须很明显,30%以上都是蛋白质才会低于1.9)
OD260/OD230:估计盐、苯酚的残留
OD260/OD280≈1.8~2.0,OD260/OD280<2.0可能是蛋白污染所致, 质量较好的RNA的R值应在1.8~2.0之间,当R<1.8时,溶液中的蛋白质等有机物的污染比较明显,可以增加酚抽提;当R>2.2时,说明RNA或者DNA已经被水解成了单核苷酸(存疑)。
OD260/OD230应大于2。OD260/OD230<2说明可能有盐和苯酚残留,可以再次沉淀和70%乙醇洗涤。
对植物样品而言,260/230 为 1,肯定是有多糖残留的。
怎样帮助记忆:蛋白质分质量最大,所以峰值最大,为280;核酸分质量次之,所以为260,phenol和盐类分质量最小,所以为230. (虽然分质量与OD峰值可能并无关系)
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