实验八 平皿计数法测定生活饮用水的菌落总数

1.学会使用高压蒸汽灭菌器。

2.掌握营养琼脂的配制方法。

3.测定生活饮用水的菌落总数。

二、实验原理

水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后，所得1mL水样所含菌落的总数即为菌落总数。

三、主要试剂和仪器

1.营养琼脂：取营养琼脂33.0g，加热溶解于1000mL蒸馏水中，分装三角瓶，121℃高压灭菌15分钟，备用高压蒸汽灭菌器。

2.培养箱36℃±1℃。

3.电炉。

4.冰箱。

5.放大镜或菌落计数器。

6.灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管等。

四、检验步骤

    1.饮用水

以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45℃的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。

待冷却凝固后，翻转平皿，使地面向上，置于36℃±1℃培养箱内培养48h,进行菌落计数，即为水样1mL中的菌落总数。

2.水源水

以无菌操作方法吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1:10稀释液。

吸取1:10的稀释液1mL注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成1:100稀释液。按同法一次稀释成1:1000,1:10000稀释液等备用。如此递增稀释液一次，必须更换一支1mL灭菌吸管。

用灭菌吸管取未稀释的水样和2个~3个适宜稀释度的水样，分别注入灭菌平皿内，一下操作同生活饮用水的检验步骤。

    五、数据记录与处理

饮用水菌落总数检验原始记录

N:内样

W：外样

内控指标：直饮水：≤50

          出厂水：≤50

          管网水：≤100

不同稀释度的选择及报告方法：

1.首先选择平均菌落数在30~300之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此选择范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之。

2.若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30~300之间，则视二者之比值来决定，若其比值小于2，应报告两者的平均数。若大于等于2则报告其中稀释度较小的菌落总数。

3.若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

4.若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应以按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

5.若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，则应以接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。

6.若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以未检出报告之。

本次试验选择了两个稀释度，其生长的菌落数在30~300之间所以按一下方法计算：

  稀释度选择及菌落总数报告方式

六、讨论

1.选择不同的稀释度，根据结果的不同报告方式也有所不同，必须严格按照规定来计算。

2.作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时用。在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落分布又恨均匀，则可将此半皿计数后乘以2以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数。