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试题：回答下列有关绿叶中色素提取与分离实验相关的问题：迁移率（Rf）是用纸层析法分离混合色素中各种成分的重要指标，也可用于各色素的鉴定，迁移率=色素移动距离/溶剂移动距离。

根据下表数据求出色素3的迁移率（Rf）是______；色素1的名称是______，其迁移率最高的原因是______。

  叶绿体中色素层析结果（部分数据）

答案：0.20  胡萝卜素  在层析液中的溶解度最大，在滤纸条上的扩散速度最快

分析：据表格分析，色素3平均移动距离=（1.9+1.5+1.4）÷3=1.6；迁移率=色素移动距离/溶剂移动距离=1.6/8.0=0.20．色素1的迁移率最高，说明在层析液中的溶解度最大，在滤纸条上的扩散速度最快，名称是胡萝卜素。

纸层析法又称纸色谱法。以纸为载体的色谱法。将试样点在纸条的一端，然后在密闭的槽中用适宜溶剂进行展开。当组分移动一定距离后，各组分移动距离不同，最后形成互相分离的斑点。将纸取出，待溶剂挥发后，用显色剂或其他适宜方法确定斑点位置。根据组分移动距离（Rf值）与已知样比较，进行定性。

一、纸层析分离原理

用滤纸作液体的载体，附载在滤纸上的H2O作固定相，有机溶剂作流动相。点样后，用流动相展开，使样品中各组分分离，是最简单的液－液分配层析。

点样后的滤纸一端浸没于流动相液面之下，由于毛细作用，有机相即流动相开始从滤纸的一端向另一端渗透扩展。当有机相沿滤纸经点样处时，样品点上的溶质在水和有机相之间不断进行分配，一部分样品离开原点随有机相移动，进入无溶质区，此时又重新分配，一部分溶质由有机相进入固定相（水相）。随着有机相的不断移动，因样品中各种不同的溶质组分有不同的分配系数，移动速率也不一样，所以各种不同的部分按其各自的分配系数不断进行分配，并沿着流动相流动的方向移动，从而使样品中各组分得到分离和纯化。

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二、迁移率Rf值

可以用相对迁移率（Rf）来表示一种物质的迁移：Rf=组分移动的距离/溶剂前沿移动的距离=原点至组分斑点中心的距离/原点至溶剂前沿的距离。

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Rf值是衡量各组分的分离情况的数值，Rf值在0到1之间，Rf值相差越大，分离效果越好。

在滤纸、溶剂、温度等各项实验条件恒定的情况下，各物质的Rf值是不变的，它不随溶剂移动距离的改变而变化。

三、影响纸层析分离中迁移率因素

纸层析分离中影响迁移率的因素有样品物质结构、样品分子极性、滤纸、层析溶剂、pH值、温度、展开方式和样品溶液中杂质等。

1．样品物质结构和分子极性

样品物质结构和分子 极性是影响迁移率的主要因素。

2．滤纸

不同滤纸的厚薄和纤维松紧度各不相同，结合的水量不一样。

滤纸上所含的杂质影响迁移率，必要时要进行预处理。

3．层析溶剂

同一物质在不同的溶剂系统中进行层析分离时迁移率不同。溶剂系统中的试剂若纯度不够，需用离心机 进行预处理。

4．pH值

溶剂和样品的pH值会影响物质的解离，从而影响物质的极性和溶解度，使迁移率改变。

溶剂的酸碱度增大，则流动相的含水量增大，使极性物质的迁移率增大。反之迁移率降低。

5．温度

温度影响物质在两相中的溶解度，即影响分配系数。温度影响滤纸纤维的水合作用，即影响固定相的体积。在多元溶剂系统中，温度显著影响溶剂系统的含水量，即影响流动相的组分比例。所以温度的改变使迁移率变化很大，纸层析分离必须在恒温条件下进行。某些对温度敏感的溶剂系统，最好不要配成饱和溶液。

6．展开方式

同一物质在其它纸层析条件相同的情况下，不同的展开方式所得到的迁移率不同。

7．样品溶液中杂质

样品溶液中杂质影响迁移率，必要时要用离心机进行预处理。