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荚膜染色法

(2014-10-17 20:20:07)
标签:

微生物

细菌

染色

荚膜

分类: 微生物学实验技术

荚膜染色法

  一、目的要求

  学习并掌握荚膜染色的基本方法。

  二、基本原理

  荚膜是包围在细菌细胞外面的一层粘液性物质,其主要成分是多糖类,不易被染色,故常用衬托染色法,即将菌体和背景着色,而把不着色且透明的荚膜衬托出来。荚膜很薄,易变形,因此,制片时一般不用热固定。

  三、器材

  圆褐固氮菌(Azotobacter chroococcum);

  荚膜染色液,纯甲醇等。

  四、操作步骤

方法一:

  1.在载玻片一端滴一滴无菌水,取少许培养了72小时的圆褐固氮菌在水滴中制成悬液。取一滴新配好的黑色素溶液(也可用绘图墨水)与菌悬液混合,另取一块载玻片作为推片,将推片一端平整的边缘与菌悬液以30度角接触后,顺势将菌悬液推向前方,使其成匀薄的一层,风干。

  2.用纯甲醇固定1分钟。

  3.加番红液数滴于涂片上,冲去残余甲醇,并染30秒钟,以细水流适当冲洗,吸干后油镜检查,背景黑色,荚膜无色,细胞红色。

方法二:

   将刚果红水溶液和明胶水溶液各一滴滴于干净载片上;用接种环蘸取细菌培养液或悬浮液在载片上于上述两滴溶液混匀,自然干燥;滴加1%HCl冲洗,使涂片呈蓝色;用蒸馏水漂洗,除去HCl;,用美蓝复染1分钟,水洗,自然干燥后镜检。
镜检:有荚膜的菌,菌体蓝色,荚膜不着色,背景蓝紫色;无荚膜的菌,菌体蓝色,背景蓝紫色。由于干燥菌体收缩,菌体四周也可能有一圈狭窄的不着色环,但这不是荚膜。荚膜不着色的部分宽。 

方法三:TyLer
    a
、涂片:按常规法涂片,在空气中自然干燥。
    b
、染色:用结晶紫冰醋酸染5—7分钟。
    c
、用20%CuSO4水溶液洗,再用毛边纸吸干。
    d
、镜检并观察结果:荚膜蓝紫色,细胞暗蓝色。

方法四: 湿墨汁法

                a、制菌液:加一滴墨汁于洁净的波片上,并挑少量菌与其充分混合。
                b
、加盖玻片:放一清洁盖玻片于混合液上,然后在盖玻片上放一张滤纸,向下 轻压,吸收多余菌               液。
                c
、镜检。

  五、实验报告

  1.结果

  绘图说明圆褐固氮菌菌体及荚膜的形状。

  2.思考题

  为什么在荚膜染色中一般不用热固定,而用纯甲醇进行固定?

 

荚膜染色液

  1.黑色素水溶液

  黑色素 5g

  蒸馏水 100ml

  福尔马林(40%甲醛) 05ml

  将黑色素在蒸馏水中煮沸5分钟,然后加入福尔马林作防腐剂。

  2.番红染液

          与革兰氏染液中番红复染液相同。

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