荚膜染色法

　　一、目的要求

　　学习并掌握荚膜染色的基本方法。

　　二、基本原理

　　荚膜是包围在细菌细胞外面的一层粘液性物质，其主要成分是多糖类，不易被染色，故常用衬托染色法，即将菌体和背景着色，而把不着色且透明的荚膜衬托出来。荚膜很薄，易变形，因此，制片时一般不用热固定。

　　三、器材

　　圆褐固氮菌（Azotobacter chroococcum）；

　　荚膜染色液，纯甲醇等。

　　四、操作步骤

方法一：

　　1．在载玻片一端滴一滴无菌水，取少许培养了72小时的圆褐固氮菌在水滴中制成悬液。取一滴新配好的黑色素溶液（也可用绘图墨水）与菌悬液混合，另取一块载玻片作为推片，将推片一端平整的边缘与菌悬液以30度角接触后，顺势将菌悬液推向前方，使其成匀薄的一层，风干。

　　2．用纯甲醇固定1分钟。

　　3．加番红液数滴于涂片上，冲去残余甲醇，并染30秒钟，以细水流适当冲洗，吸干后油镜检查，背景黑色，荚膜无色，细胞红色。

方法二：

  ① 将刚果红水溶液和明胶水溶液各一滴滴于干净载片上；用接种环蘸取细菌培养液或悬浮液在载片上于上述两滴溶液混匀，自然干燥；滴加1%HCl冲洗，使涂片呈蓝色；用蒸馏水漂洗，除去HCl；，用美蓝复染1分钟，水洗，自然干燥后镜检。
镜检：有荚膜的菌，菌体蓝色，荚膜不着色，背景蓝紫色；无荚膜的菌，菌体蓝色，背景蓝紫色。由于干燥菌体收缩，菌体四周也可能有一圈狭窄的不着色环，但这不是荚膜。荚膜不着色的部分宽。 

方法三：TyLer法
    a 、涂片：按常规法涂片，在空气中自然干燥。
    b、染色：用结晶紫冰醋酸染5—7分钟。
    c、用20%CuSO₄水溶液洗，再用毛边纸吸干。
    d、镜检并观察结果：荚膜蓝紫色，细胞暗蓝色。

方法四： 湿墨汁法

　　五、实验报告

　　1．结果

　　绘图说明圆褐固氮菌菌体及荚膜的形状。

　　2．思考题

　　为什么在荚膜染色中一般不用热固定，而用纯甲醇进行固定？

荚膜染色液

　　1．黑色素水溶液

　　黑色素 5g

　　蒸馏水 100ml

　　福尔马林(40%甲醛) 0．5ml

　　将黑色素在蒸馏水中煮沸5分钟，然后加入福尔马林作防腐剂。

　　2．番红染液