加载中…Western blot相关试剂的配制
(2015-01-06 09:25:17)
标签：
分子生物学western试剂配制 |
分类： 专业相关.... |
Western blot相关试剂的配制
1)
2) 1.0 mol/L Tris（pH7.5）：称量60.55g Tris置于1L烧杯中，加入约400mL去离子水，充分搅拌溶解。用浓盐酸调节pH值至7.5，定容至500mL，室温或者4℃保存。
3)
4) 30%丙稀酰胺（100mL）：称量丙烯酰胺29g，双丙烯酰胺1g，加入约60mL去离子水，充分搅拌溶解，定容至100mL，4℃保存。
5) 10% SDS：称量10g高纯度（电泳级）的SDS置于200mL烧杯中，加入约80mL去离子水，加热溶解，定容至100mL，室温保存。
6) 10%过硫酸铵（Ammonium
7) 5×SDS上样缓冲液（5mL）：1mol/L Tris·HCl（pH6.8）1.25mL、二硫苏糖醇（DTT，MW154.5）0.39g、SDS 0.5g、溴酚蓝0.025g、甘油2.5mL、混匀后，定容至5mL，分装于1.5mL离心管中，4℃保存。
8)
9) 转膜缓冲液：称取Tris 5.8g，甘氨酸11.6g、SDS 0.75g于烧杯中，加入700mL双蒸水，溶解后定容至800mL，最后加入甲醇200mL。
10) TBS缓冲液：称取NaCl 8.8g于800mL蒸馏水中，溶解，加入10mL 1mol/L Tris HCl（pH7.5），定容至1L，室温保存。
11) TBST缓冲液：1L TBS缓冲液中加入20% Tween20 5mL，使Tween20的终浓度为0.1%，现用现配。
12) 封闭液，抗体稀释液：TBST缓冲液中加入5%脱脂奶粉或BSA，现用现配。
表1 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液
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溶液成分 |
不同体积（ml）凝胶液中各成分所需体积（ml） |
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5 |
10 |
15 |
20 |
25 |
30 |
40 |
50 |
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6% |
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2.6 |
5.3 |
7.9 |
10.6 |
13.2 |
15.9 |
21.2 |
26.5 |
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1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
8 |
10 |
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1.3 |
2.5 |
3.8 |
5 |
6.3 |
7.5 |
10 |
12.5 |
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0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
0.4 |
0.5 |
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0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
0.4 |
0.5 |
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0.004 |
0.008 |
0.012 |
0.016 |
0.02 |
0.024 |
0.032 |
0.04 |
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8% |
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2.3 |
4.6 |
6.9 |
9.3 |
11.5 |
13.9 |
18.5 |
23.2 |
|
|
1.3 |
2.7 |
4 |
5.3 |
6.7 |
8 |
10.7 |
13.3 |
|
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1.3 |
2.5 |
3.8 |
5 |
6.3 |
7.5 |
10 |
12.5 |
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0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
0.4 |
0.5 |
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0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
0.4 |
0.5 |
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0.003 |
0.006 |
0.009 |
0.012 |
0.015 |
0.018 |
0.024 |
0.03 |
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10% |
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1.9 |
4 |
5.9 |
7.9 |
9.9 |
11.9 |
15.9 |
19.8 |
|
|
1.7 |
3.3 |
5 |
6.7 |
8.3 |
10 |
13.3 |
16.7 |
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1.3 |
2.5 |
3.8 |
5 |
6.3 |
7.5 |
10 |
12.5 |
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0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
0.4 |
0.5 |
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0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
0.4 |
0.5 |
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0.002 |
0.004 |
0.006 |
0.008 |
0.01 |
0.012 |
0.016 |
0.02 |
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12% |
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1.6 |
3.3 |
4.9 |
6.6 |
8.2 |
9.9 |
13.2 |
16.5 |
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2 |
4 |
6 |
8 |
10 |
12 |
16 |
20 |
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1.3 |
2.5 |
3.8 |
5 |
6.3 |
7.5 |
10 |
12.5 |
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0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
0.4 |
0.5 |
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0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
0.4 |
0.5 |
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0.002 |
0.004 |
0.006 |
0.008 |
0.01 |
0.012 |
0.016 |
0.02 |
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15% |
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1.1 |
2.3 |
3.4 |
4.6 |
5.7 |
6.9 |
9.2 |
11.5 |
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2.5 |
5 |
7.5 |
10 |
12.5 |
15 |
20 |
25 |
|
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1.3 |
2.5 |
3.8 |
5 |
6.3 |
7.5 |
10 |
12.5 |
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0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
0.4 |
0.5 |
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0.05 |
0.1 |
0.15 |
0.2 |
0.25 |
0.3 |
0.4 |
0.5 |
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|
0.002 |
0.004 |
0.006 |
0.008 |
0.01 |
0.012 |
0.016 |
0.02 |
表2 配制6% Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳5%积层胶所用溶液
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溶液成分 |
不同体积（ml）凝胶液中各成分所需体积（ml） |
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1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
8 |
10 |
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|
|
|
|
|
|
|
0.68 |
1.4 |
2.1 |
2.7 |
3.4 |
4.1 |
5.5 |
6.8 |
|
|
0.17 |
0.33 |
0.5 |
0.67 |
0.83 |
1 |
1.3 |
1.7 |
|
|
0.13 |
0.25 |
0.38 |
0.5 |
0.63 |
0.75 |
0 |
1.25 |
|
|
0.01 |
0.02 |
0.03 |
0.04 |
0.05 |
0.06 |
0.08 |
0.1 |
|
|
0.01 |
0.02 |
0.03 |
0.04 |
0.05 |
0.06 |
0.08 |
0.1 |
|
|
0.001 |
0.002 |
0.003 |
0.004 |
0.005 |
0.006 |
0.008 |
0.01 |
室温保存。
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