1、什么是细胞培养

培养的细胞由于细胞增殖，数量增加，细胞难以继续生长繁殖，需要进行分瓶培养，将培养的细胞分散，以1:2或1:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养，即为传代培养，一般细胞可传代10-50代

2、细胞的贴壁过程

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3、培养细胞的一代生长过程

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①潜伏期：细胞从接种到贴壁生长繁殖的一段时间

二倍体细胞系该段时间较长，大概为24-96h；连续细胞系时间短，大概10-30min

②指数生长期：细胞增殖最旺盛时期，此时进行细胞实验较佳

指数生长期持续3-5d后，随细胞数量不断增多，生长空间日趋减少，细胞相互接触汇合成片，呈现接触抑制。而恶性细胞则无接触抑制现象；癌细胞则由于营养成分的消耗和细胞代谢产物的影响而发生密度抑制。

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③停滞期：细胞数量达到饱和密度后，细胞与营养液的交换面积减少，代谢产物积累，pH下降细胞停止增殖，进入停滞期。此时应该进行细胞传代，但是得传1-2代细胞才能恢复。

4、细胞传代的一般步骤

a、悬浮细胞

可采用加入等量新鲜培养基后直接吹打分散进行传代，或用离心法后，加入新培养基后再吹打分散进行传代

b、贴壁细胞

①实验准备，超净台喷洒酒精，紫外照射30min。准备好培养瓶/皿，离心管，10%DMEM，0.25%胰酶，D-hanks液等，带上手套，口罩等

②倒去旧培养基，用D-hanks液清洗一遍，去除沉积的死细胞等

③加入2ml 0.25％胰蛋白酶消化液，消化2～3min，倒置显微镜下观察，待细胞单层收缩突起出现空隙时，倒去酶液。

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④加入1～2滴管含有血清的培养液，反复吹打细胞，使其成细胞悬液

⑤以1：2或1：3进行分装，补充新鲜培养基，并在培养瓶上做好标记，注明代号、日期，轻轻摇匀，37 ℃CO2培养箱培养。

⑥细胞培养24h后，即可观察培养液的颜色及细胞的生长情况

5注意事项

①传代培养时要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染。所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。每次最好只进行一种细胞的操作。每一种细胞使用一套器材。培养用液应严格分开。

②传代时间的掌握：每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。

③消化时间的掌握