北京川布兰试剂盒试用报告

基本情况
单位名称	吉林大学附属中学高中部
试用人	郭东岗
申请试剂盒名称	土壤中分解尿素的细菌的分离与计数试剂盒
申请渠道	1.洛阳会议    2.朋友推荐   3.教研组织  4.网络
1、有无生物新课标实验室？ 2、有无相关仪器配备？ 3、是否开展过相关实验？	有新课标实验室 有实验相关的仪器设备（如超净工作台） 未开展过该实验

试用过程与结果

实验名称：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数

实验仪器及实验材料：

实验仪器：超净工作台、取样铲、微量可调式移液器、试管、锥形瓶、恒温箱、培养皿、高压蒸汽灭菌器。

实验材料：花盆土、无菌水、灭菌的信封、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数试剂盒（川布兰）。

实验步骤：
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图1  培养基的配制

（配制尿素选择培养基和LB固体培养基使用川布兰公司土壤中分解尿素的细菌的分离与计数试剂盒）

①取样(取花盆土1g，放入灭过菌的信封中备用)

↓

②样品的梯度稀释(在超净工作台中，将1g花盆土，加入到盛有99mL无菌水的锥形瓶中，震荡摇匀，制成10²倍的稀释液；用移液器吸取1mL10²倍的稀释液，加入到盛有9mL无菌水的试管中，震荡摇匀，制成10³倍的稀释液；依次类推，配制出10⁴、10⁵、10⁶、10⁷倍的土壤稀释液)

↓

③接种和培养(分别取10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶、10⁷倍的土壤稀释液200uL，分别加到尿素培养基和LB固体培养基上，用涂布器将稀释液均匀涂布在培养基表面，静置10min后，放在37℃恒温培养箱中培养24h)

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④观察

实验结果

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实验结果分析：

通过尿素培养基与LB固体培养基的培养结果的对照，可以明显观察到取自同一个稀释倍数的土壤稀释液接种到尿素选择培养基和LB固体培养基后得到的菌落数不同。鉴于两种培养基间的不同在于尿素培养基的氮源是尿素，因而可以确定在尿素培养基上具有能够分解尿素的微生物。

若要从尿素选择培养基中的菌落中分离纯化出纯种尿素分解菌，则需要对培养基上的菌落做进一步的鉴定。

使用试剂盒心得：

优点：传统的试剂配制方法较为复杂，况且每次都要根据实际需要计算各种试剂的比例，在本实验中，若使用传统方法配制尿素固体培养基和LB固体培养基，中学生物实验教师需要大量时间来配制。川布兰公司的土壤中分解尿素的细菌的分离试剂盒中含有尿素培养基和LB固体培养基的成分，并且已经严格按照正常配方的比例混合均匀，这样就大大提高了实验教师的工作效率。

试剂盒或仪器使用改进意见：

将试剂盒中提供的尿素液体改为尿素固体，或单独存放，或按比例加入尿素固体培养基的瓶中。