试剂盒试用报告

试用过程与结果

实验名称：人性别的鉴定

实验仪器及实验材料：

PCR仪，微量移液器，带有毛囊的头发，人性别鉴定的试剂盒（包括Taq聚合酶，缓冲液，Mgcl2,dNTPS，引物I，引物II），电泳仪，琼脂糖凝胶

实验步骤（含操作过程照片）：

1、配制预混液   首先打开试剂盒，取出PCR预混液的各种成分，放入离心机里离心数秒中。之后根据你所要求组数，计算所需各种组分的数量，配制成PCR预混液，再在0.5mL离心管中加入下列成分：

     PCR预混合液                                  19μL

     模版DNA                                      1μL

     总体积                                         20μL

（见图一、图二）

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2、每组拔取3根带有毛囊的头发（两男两女），剪下毛囊，分别放入0.5ml的离心管中，做好标记，取20μ已配好的预混液加入到离心管中，然后加入15μL液体石蜡

3、将离心管放人全自动基因扩增仪中，按照下列反应程序设定参数，进行扩增实验。（ 见图三）

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4、制作琼脂糖凝胶块  

（1） 配胶  将50×电泳缓冲液稀释至1×电泳液冲液。取0.25g琼脂糖加到装有25mL 1×电泳缓冲液的150mL三角瓶中，瓶口用封口膜封住，在沸水浴或微波炉内加热至琼脂糖完全熔化。

（2）倒胶：把U型凝胶托盘放入制胶槽中，插好梳子，把配好的琼脂糖凝胶，倒入凝胶板，待凝固后，拔出梳子，把凝胶点样孔一端靠负极方向，放入电泳槽中。（见图四、图五）

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5、点样：吸取PCR反应产物20μL转移到一个新离心管中，加入1μL 6×Loading Buffer 和1μL核酸荧光染料充分混合，取10μL加入点样孔内。

6、点样后盖好盖子，连接正负极，在80V恒压条件下电泳。电泳20分钟  （见图六）

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注意事项：

加样不宜过多，以免跑不开电泳，一般20μL DNA中加入2μL染料和6×Loading Buffer混合物混匀，取10μL加入点样孔；恒压电泳时把电流调到最大，恒压80V电压。

7、放在图谱观察仪观察  （见图七、图八）

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实验结果（实验结果照片 见图九）：

有亮的条带是男的，没有条带的是女的

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实验结果分析：

电泳之后，男的条带亮度有一根亮，另外一根不是很亮，可能跟取材有关，也可能点样的时候操作有误差。以后要多做几组，效果可能更明显。

使用试剂盒心得（使用试剂盒与传统配制试剂方法组织开展同一实验有何优势和不足）

方便，减轻了老师的工作量，也有利于节约实验材料，实验效果也很好。

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