临床症状、体格检查和临床病理学变化通常建立肾上腺皮质机能亢进的推定性诊断，腹部超声波检查提供关于损伤部位（即垂体腺或肾上腺皮质）的有价值性信息。确诊和确定病因需要进行垂体-肾上腺皮质轴特异的诊断试验。确诊肾上腺皮质机能亢进的试验包括ACTH刺激试验、低剂量地塞米松抑制试验（LDDS）以及地塞米松抑制试验和ACTH刺激试验结合试验（V试验）。基础早晨血浆可的松检测本身对肾上腺皮质机能亢进的诊断无意义。同样，主人在家随机采集的尿液可的松/肌酐率正常可排除肾上腺皮质机能亢进，但比率增加不足以确诊肾上腺皮质机能亢进。犬患有其它疾病而非肾上腺皮质机能亢进时，也常出现尿可的松/肌酐比率升高。

    一旦确诊为肾上腺皮质机能亢进，可进行鉴别试验查出病因（即PDH与AT），确定最适宜的治疗方案以及更准确地判断预后。鉴别试验包括低剂量地塞米松抑制试验（LDDS试验）、高剂量地塞米松抑制（HDDS）试验和基础血浆内源性ACTH浓度。是否需要做鉴别试验部分取决于腹部超声波检查结果，以及如果发现AT，主人是否愿意做肾上腺切除术。如果腹部超声波检查结果是非结论性的，或主人不愿意考虑手术，应开始对PDH进行药物治疗。无论是否进行鉴别试验，犬肾上腺皮质机能亢进为PDH的机率是80%~85%，这种可能性通过腹部超声波检查可进一步提高。

    最常用于诊断肾上腺皮质机能亢进和鉴别PDH和AT的检测包括ACTH刺激试验、低剂量地塞米松抑制试验和腹腔超声波检查。尿可的松/肌酐率可用于初始筛查肾上腺皮质机能亢进，但更常用于前面试验结果正常或为非决定性且犬临床症状不明确时，进一步排除肾上腺皮质机能亢进。当腹部超声波检查结果与垂体-肾上腺皮质轴试验结果不一致（例如，超声波检查发现肾上腺肿瘤而试验结果暗示存在PDH）或超声波检查结果不明确（例如，双侧肾上腺肿瘤或单侧肾上腺肿瘤而对侧肾上腺大小正常）时，通常应评价内源性ACTH浓度。只有无法做腹部超声波检查且LDDS试验无法确诊PDH时，才进行HDDS试验。

    没有一种诊断试验对于肾上腺皮质机能亢进的诊断是完全可靠的。对于肾上腺皮质机能亢进的犬，所有试验的结果都可能正常；而对于非肾上腺疾病犬，这些试验也可能异常。当出现意外结果或结果有疑问时，应做其它诊断性试验或重复该诊断性试验，最好是1~2月后复检。有时，同一动物不同诊断试验的结果相互矛盾。是否进行鉴别试验或开始治疗取决于兽医怀疑该病的程度。当要确诊肾上腺皮质机能亢进时，应考虑病史和体格检查结果，并结合常规血液学检查和垂体-肾上腺皮质轴试验作出诊断。怀疑诊断或不确定时，应延迟治疗并于1~3个月后复检。

尿液可的松/肌酐比率　肾上腺皮质机能亢进犬相对于健康犬，24小时尿液中的游离可的松排泄量会增加，通常可用常规可的松放射性免疫分析方法直接测定未浓缩的尿液可的松量。相对于健康犬，自发性肾上腺皮质机能亢进犬随机尿液可的松/肌酐比率也会明显升高。但在非肾上腺疾病以及临床症状与肾上腺皮质机能亢进一致但垂体-肾上腺皮质轴正常的犬，尿可的松/肌酐比率也会升高。在一非肾上腺皮质机能亢进犬与肾上腺皮质机能亢进犬的对照研究中，尿可的松/肌酐比率的特异性仅为20%。因此，尿液可的松/肌酐比率正常可排除肾上腺皮质机能亢进，用作筛查检测，但尿可的松/肌酐比率升高并不能确诊为自发性肾上腺皮质机能亢进。理想上来说，尿可的松/肌酐比率的检测应用无应激时自发排泄的尿液，这可由主人在家收集。驱车带犬去医院以及采集尿液前进行体格检查都会使测定值升高。

ACTH刺激试验　ACTH刺激试验是诊断犬肾上腺皮质机能亢进的一个相对可靠、简单且安全的试验。如果开始治疗前做本试验，它还可与治疗后进行对比。ACTH刺激试验诊断肾上腺皮质机能亢进的准确性约80%。约20%肾上腺皮质机能亢进犬的ACTH刺激试验结果正常。如果怀疑肾上腺皮质机能亢进，ACTH刺激试验结果正常并不能排除肾上腺皮质机能亢进。ACTH刺激试验也不能鉴别PDH和AT，同时也不能可靠地鉴别肾上腺瘤与肾上腺癌，但它是检查医源性肾上腺皮质机能亢进的理想试验。

我们用四个值的范围来解释ACTH刺激试验。ACTH注射后血浆可的松浓度介于6~17μg/dl间时为正常；浓度为5μg/dl或更低时暗示存在医源性肾上腺皮质机能亢进或自发性肾上腺皮质机能减退；浓度介于18~24μg/dl间时为自发性肾上腺皮质机能亢进的临界值；浓度超过24μg/dl时，确诊为自发性肾上腺皮质机能亢进。ACTH刺激后血浆可的松浓度升高，特别是介于18~24μg/dl间时，本身不能确诊为肾上腺皮质机能亢进，特别是临床特征和临床病理学数据与诊断不一致时。一些无肾上腺皮质机能亢进犬的检测结果可能是异常的。部分犬无疑是代表正常值的上限，可引起肾上腺皮质增生以及肾上腺对ACTH刺激过度反应的慢性应激（例如，慢性严重疾病）可能影响了其它犬的试验结果。

    如果注射ACTH后血浆可的松浓度与注射前相比未升高，特别是可的松浓度低于正常基础范围（即＜5μg/dl）时，表明存在医源性肾上腺皮质机能亢进或自发性肾上腺皮质机能减退。近期用过糖皮质激素的病史和犬的临床表现有助于鉴别医源性肾上腺皮质机能亢进和自发性肾上腺皮质机能减退。在罕见情况下，AT犬对ACTH的反应很小，但其ACTH刺激前后的血浆可的松浓度都位于参考范围内或高于参考值上限。

低剂量地塞米松抑制试验　在正常犬中，静脉注射相对小剂量的地塞米松可抑制垂体分泌ACTH，引起循环可的松浓度长时间下降（即可达24小时）。之所以使用地塞米松，是因为它不会干扰放射性免疫试验检测血浆可的松浓度。PDH犬的垂体异常会一定程度地抵抗地塞米松的负反馈作用，同时地塞米松的代谢清除作用也可能异常加快。当小剂量地塞米松用于PDH犬时，会很快引起血浆可的松浓度不同程度地受抑制，但使用地塞米松8小时后，将不再有抑制作用。因此，与正常犬相比，垂体瘤犬对地塞米松的作用具有相对抵抗作用。患功能性ATs犬能自主分泌可的松，并抑制内源性ACTH的分泌。因此这些肿瘤的功能不受ACTH控制。当犬患AT时，无论地塞米松剂量大小以及何时采样，地塞米松都不会影响血浆可的松浓度，因为垂体促皮质激素细胞已经被抑制且血清ACTH浓度无法检测。

    低剂量地塞米松抑制试验是鉴别正常犬与肾上腺皮质机能亢进犬的一个可靠诊断试验，其准确性约为85%。本试验曾用作确诊肾上腺皮质机能亢进的首选试验，且当ACTH刺激试验结果出现意外时用作“第二道防线”。它不能用于诊断医源性肾上腺皮质机能亢进，也不能用于评价犬对米托坦或酮康唑治疗的反应。正常或无定论的低剂量地塞米松抑制试验结果本身不能排除肾上腺皮质机能亢进。如果怀疑肾上腺皮质机能亢进，应做垂体-肾上腺皮质轴的其它试验。同样，异常的低剂量地塞米松抑制试验结果本身也不能确诊肾上腺皮质机能亢进。低剂量地塞米松抑制试验结果可能受抗癫痫药物、应激（例如，洗澡、同时进行的其它试验）、外源性糖皮质激素和非肾上腺疾病的影响。非肾上腺疾病越严重，低剂量地塞米松抑制试验结果越可能出现假阳性。进行低剂量地塞米松抑制试验时，应将所有的应激控制到最小是十分重要的。只有试验完毕后，才能做其它的操作。判读结果时，应考虑临床疾病的影响。

    地塞米松可选用地塞米松磷酸钠或地塞米松聚乙二醇溶液。使用地塞米松8小时后血浆可的松浓度可用于确诊肾上腺皮质机能亢进。使用地塞米松8小时后，正常犬血浆可的松浓度小于1.0μg/dl，而PDH或AT犬血浆可的松浓度为1.4μg/dl或更高。血浆可的松浓度介于1.0~1.4μg/dl间时无诊断意义，不能确诊或也不能排除诊断。如果结果处于无诊断性范围，兽医必须依赖其它信息，包括其它垂体-肾上腺皮质轴试验确定是否存在肾上腺皮质机能亢进。

    如果使用地塞米松8小时后可的松浓度支持肾上腺皮质机能亢进的诊断，使用后4小时的可的松浓度则可用于鉴别PDH和AT。本试验前2~6小时，低剂量地塞米松抑制约60%PDH犬垂体的ACTH分泌和血浆可的松浓度。而在AT犬中不会出现抑制作用，约40%的PDH犬也不会出现。抑制定义为：（1）使用地塞米松4小时后血浆可的松浓度小于1.4μg/dl；（2）使用地塞米松4小时后血浆可的松浓度小于基础浓度的50%；（3）使用地塞米松后8小时血浆可的松浓度小于基础浓度的50%。任何犬表现出三个血浆浓度中一种或多种的肾上腺皮质机能亢进都可能是PDH。如果未出现任何一种血浆浓度，低剂量地塞米松抑制试验结果表明无抑制作用。无抑制作用是非特异的结果，它可证实肾上腺皮质机能亢进，但无法鉴别垂体性还是肾上腺性。PDH和AT的鉴别必须取决于腹部超声波、高剂量地塞米松抑制试验或血浆内源性ACTH浓度的结果。

地塞米松抑制试验和ACTH刺激试验组合试验（V试验）　Ⅴ试验用于筛查肾上腺皮质机能亢进。它不能准确地鉴别PDH和AT，故不能用于此鉴别诊断。理论上来说，使用地塞米松后，肾上腺皮质机能亢进犬并不表现出血浆可的松浓度受抑制，而使用ACTH后，则出现明显的反应。然而，一些肾上腺皮质机能亢进犬使用地塞米松后表现出抑制反应，或ACTH刺激试验的反应正常。因此，使用地塞米松后和ACTH后血浆可的松浓度应单独判读。当Ⅴ试验中一个暗示为肾上腺皮质机能亢进而另一个正常时，应进行其它的筛查试验，最好是低剂量地塞米松抑制试验，以建立确诊。

高剂量地塞米松抑制试验　肾上腺皮质肿瘤的功能不受垂体ACTH的控制。因此如果可的松的来源是肾上腺皮质肿瘤，无论地塞米松剂量多少都不会抑制血浆可的松浓度。相反，地塞米松对垂体瘤分泌ACTH的抑制作用不定，主要取决于地塞米松的剂量。逐渐增加地塞米松剂量，最终可抑制多数PDH犬垂体分泌ACTH。除用于抑制PDH犬垂体分泌ACTH的地塞米松的剂量更大（即0.1mg/kg）外，HDDS试验的方案与LDDS试验类似。给药后4小时的血样采集可有可无，根据经验，此时血样检测结果仅在2%进行LDDS和HDDS的犬具有意义。抑制定义为注射地塞米松后4或8小时血浆可的松浓度小于1.4μg/dl，或注射地塞米松后4或8小时血浆可的松浓度小于基础血浆可的松浓度的50%。任何肾上腺皮质机能亢进犬表现出上述四种血清浓度的一种或多种时，极有可能是PDH。约75%的PDH犬会表现出上述结果中一种以上的血浆可的松浓度。如果动物未出现上述血浆可的松浓度，表明无抑制作用。约25%PDH和100%AT犬不表现出抑制作用。更高剂量的地塞米松（例如，1.0mg/kg）可用于抑制地塞米松抵抗的PDH犬垂体分泌ACTH。但高剂量地塞米松时表现出抑制作用的PDH犬的百分率与0.1mg/kg方案类似。

内源性ACTH浓度　基础血浆ACTH浓度的检测不用于诊断肾上腺皮质机能亢进，因为许多肾上腺皮质机能亢进犬的血浆浓度都在参考范围内（即10~110pg/ml）。但是一旦确诊肾上腺皮质机能亢进后，测定单次基础血浆ACTH浓度有助于鉴别AT和PDH。肾上腺皮质肿瘤和医源性肾上腺皮质机能亢进会抑制ACTH分泌，而PDH是ACTH分泌过量的结果。约60%AT引起肾上腺皮质机能亢进的犬血浆ACTH浓度检测不出，而85%~90%PDH犬的血浆ACTH浓度高于45pg/dl，且35%的血浆浓度高于100pg/dl。ACTH浓度介于10~45pg/dl间无决定意义。最终的治疗计划取决于腹部超声波检测结果、注射低剂量地塞米松4小时后血浆可的松浓度，必要时包括高剂量地塞米松给药后血浆可的松浓度。几个商业兽医内分泌实验室可以测定犬内源性ACTH。采样前应和实验室联系确定采样和处理方法。测定结果应根据实验室建立的参考值判读。