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有关小片段胶回收

(2010-11-01 17:42:17)
标签:

ph值

片断

回收

柱子

吸附

杂谈

分类: 专业学习材料

 

1、胶回收原理

    高盐低pH值条件下硅膜特异吸附核酸,低盐和中性pH值条件可以洗脱。先以特殊的高盐酸性溶胶液溶解含DNA片断的凝胶,把胶液上到柱子,此时柱子中央的硅膜会特异吸附核酸,经75%乙醇洗涤去杂质,再溶解就是了。原理上讲,RNA一样可以被硅膜吸附,然后洗脱即可。但是所有原料器具需要DEPC水处理。

 

2、A:我在做克隆,要把一段长20bp左右的片断装入PGL3载体中,但片断太小,酶切后回收该用什么办法?我请教了一位师兄建议我用电洗脱,但我们实验室没有这个设备,请问还有其他的方法吗?

 

B:(1)酶切时增大体系多切几管,然后多点几个胶空,一起回收,甚至可以用一个回收的柱子重复洗脱这几管的dna,然后加水以后多放置几分钟后再离心,这样的浓度应该会高一些的
    (2)连接的时候,增大目的片断与载体的比值,55-60度水浴5分钟打开环化的dna。置于冰上1-2min,再加入连接酶和buffer,16度过夜连接
   (3)转化前,将连接产物置于55-60度水浴3-5min,将一些仍然是开环的dna线性化,增大转化效率,随后立即加入感受太细胞中。

 

3、根据胶回收试剂盒说明加了20%的异丙醇于回收胶溶液里。


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