1、胶回收原理

    高盐低pH值条件下硅膜特异吸附核酸，低盐和中性pH值条件可以洗脱。先以特殊的高盐酸性溶胶液溶解含DNA片断的凝胶，把胶液上到柱子，此时柱子中央的硅膜会特异吸附核酸，经75％乙醇洗涤去杂质，再溶解就是了。原理上讲，RNA一样可以被硅膜吸附，然后洗脱即可。但是所有原料器具需要DEPC水处理。

2、A:我在做克隆,要把一段长20bp左右的片断装入PGL3载体中,但片断太小,酶切后回收该用什么办法?我请教了一位师兄建议我用电洗脱,但我们实验室没有这个设备,请问还有其他的方法吗?

B：（1）酶切时增大体系多切几管，然后多点几个胶空，一起回收，甚至可以用一个回收的柱子重复洗脱这几管的dna，然后加水以后多放置几分钟后再离心，这样的浓度应该会高一些的
    (2）连接的时候，增大目的片断与载体的比值，55-60度水浴5分钟打开环化的dna。置于冰上1-2min，再加入连接酶和buffer，16度过夜连接
   （3）转化前，将连接产物置于55-60度水浴3-5min,将一些仍然是开环的

地高辛标记核酸探针的标记方法Time：2009-10-20 AM 10:35　　Author:bioer　　Hits: 760 times 　-
        核酸探针已被广泛用于筛选重组克隆、基因多样性的种性检测和真菌种群内及种群之间的系统发育关系评价。最早使用的放射性同位素标记核酸探针具有敏感性高、特异性好、分辨力强的特点，但放射性同位素标记也存在着一系列令人困扰的问题,如成本高、探针半衰期短、放射性物质危害人体健康等。而且在进行放射性同位素标记实验时,需要有专门的实验室及相应的实验保护设施，还需要由经过培训的专业人员来操作,因而限制了在普通实验室进行分子生物学实验。
　　近几年发展起来的非放射性核酸探针大多通过酶促、光化学和化学手段掺入一种报道基团,这种报道基团可通过高灵敏度的冷光、荧光或金属沉淀等检测系统检测。另外,应用pH电极或感应器技术的电化学检测系统也有报道。在这些检测系统中,灵敏度最高的是生物素- 亲合素检测系统和半抗原-抗半抗原地高辛检测系统。由于生物样品中常含有内源性生物素及生物结合蛋白，生物素标记的核酸探针会发生一些非特异性结合，从而影响实验效果。与生物素-亲合素系统同样具有高灵敏度