[转载]FMO vs. Isotype Controls

已有 1977 次阅读 2013-8-27 15:35 |个人分类:流式知识|系统分类:科研笔记|关键词:FMO isotype control

译者：FlowJo技术支持，张庶

在进行多色实验时，除了荧光补偿所需的单染对照之外，在大多数情况下仍需使用其它的对照来帮助我们分析实验数据。

Fluorescence Minus One (FMO)对照能够帮助我们确定设门的边界，同型对照（isotypecontrol）能帮助我们确定染色的非特异性表达，而阴性对照（unstainedcontrol）能够体现系统的背景和自发荧光。

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Fig1

FMO对照是显示设门边界的理想选择，即使是对于荧光补偿的数据。FMO对照包括实验组中的所有染料，仅减少了一种需要作为对照的染料。例如，FITC染料的FMO应当是包含了所有荧光染料，仅仅缺少FITC染料。如果需要，你也可以将同型对照（isotype）纳入FMO对照体系，但是同型对照（isotype）不能准确显示染色细胞群的边界。Fig. 1显示了使用未染色对照或者同型对照相对于FMO对照进行设门时的不准确性。Fig. 2显示了FMO对照如何解决设门边界问题，即使是应用了不合适的补偿。

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Fig.2

同型对照不能作为设门对照，每种抗体都有特异和非特异的结合特性。同型对照的抗体不同于抗原特异性抗体，因为有不同的活性。同型对照可以用来判断染色的成功与否，特别是在使用一抗和二抗时。然而，同型对照并不能作为阴性和阳性群分群的可靠依据。如果坚持使用同型对照，那么也应通过滴定实验确定最适浓度。因为非特异性的抗体在过饱和状态的结合率会增加，从而使阴性群中的部分群体偏向阳性。

来源：http://flowjo.typepad.com/the_daily_dongle/2011/09/fmo-vs-isotype-controls.html