黄建宏

【摘要】  目的：探讨多肿瘤标志物蛋白芯片技术在肺癌诊断中的应用价值。方法：采用多肿瘤标志物蛋白芯片诊断系统检测30例肺癌、50例良性肺部疾病患者和40例健康体检者的12种常见肿瘤标志物。结果：肺癌组糖抗原(CA)中CA125、CA153、CA242,癌胚抗原(CEA)和铁蛋白(FER)值较其他两组明显升高(P<0.01);联合检测灵敏度80%,灵敏度较单指标检测提高约30%。结论：应用多肿瘤标志物蛋白芯片技术确定CA125、CA242、CA153和CEA的联合检测是筛检肺癌的优化组合,对肺癌的早期诊断有较高的临床应用价值。

【关键词】  肺癌 肿瘤标志物 生物芯片诊断

 

　　Application of Multi-Tumor Markers Protein Chip Diagnosis System in Diagnosing Lung Cancer

　　HUANG Jianhong,LIN Xin,OU Xingyi,Liang Xiaobing

　　The People's Hospital of Zhuhai ,Zhuhai,Guangdong 519000 , China

    Abstract:Objective To investigate the application of multi-tumor markers protein chip diagnose system in diagnosing lung cancer.Methods Using the multitumor markers protein chip diagnose system to determine and analyze the concentration values of 12 tumor markers in the sera of 30 lung cancer and 50 benign lesion patients, and 40 normal persons.Results The difference of CA125、CA153、CA242、CEA and FER was statistically significant between lung cancer groups and other two groups(P<0.01), The positive rate of the allied detection was 80%, about 30% higher than the independent items. Conclusion The allied detection of CA125、CA153、CA242 and CEA was the best combination for the diagnosis of lung cancer.

    Key words: Lung cancer；Tumor marker；Biochips diagnosis

    肺癌起病隐匿,转移快,恶性程度高,预后恶劣,早期不易诊断,70%～86%的患者就诊时己到晚期,失去了手术治疗的机会。故早期发现、早期诊断、早期治疗是提高肺癌生存率和降低病死率的关键。为了提高诊断肿瘤的准确性,临床上常将几项相关标志物联合起来对某一肿瘤进行检测。本实验室采用上海数康有限公司研制开发的“多肿瘤标志物蛋白质芯片诊断系统”,对30例肺癌、50例肺部良性疾病患者和40例健康人群进行血清多肿瘤标志物的检测,包括甲胎蛋白(AFP),癌胚抗原(CEA),前列腺特异性抗原(PSA),游离前列腺特异性抗原(f PSA),神经原特异性烯醇化酶(NSE),糖抗原(CA)中的CA199、CA125、CA153、CA242,铁蛋白(FER),β人绒毛膜促性腺激素(βHCG),人生长激素(HGH)进行定量分析,探讨其在肺癌诊断中的应用价值。

　　1  资料与方法

　　1.1  对象

　　健康对照组40例,中位年龄56岁;肺部良性疾病患者50例,中位年龄63岁;肺癌组30例,中位年龄64岁,均经病理确诊,于术前采集静脉血2 ml,分离血清待测。

　　1.2  方法

　　采用湖州数康生物科技有限公司生产的C-12进行检测。结果采用湖州数康生物科技有限公司提供的HD-2001A生物芯片检测仪进行分析。

　　1.3  操作过程

　　将蛋白芯片、标准品和浓缩洗涤液室温放置片刻,标准品用120 μl去离子水复溶轻微振荡,浓缩洗涤液用去离子水稀释20倍成洗涤液;取各待测血清100 μl及不同浓度的标准品各100 μl分别滴加到不同的芯片分格内,在37℃温浴振荡反应30 min,倾倒弃去孔内液体, 将反应液室温放置,待15 min后使用;吸取适量洗涤液加入专用芯片洗涤盒内,振摇洗涤8 min,弃去洗涤液,重复3次；每个芯片分格内加入100 μl反应液,然后将蛋白芯在37℃温浴振荡反应30 min,倾倒弃去孔内液体;取等体积的检测液A和B混合,室温放置15 min后使用; 吸取适量洗涤液加入专用芯片洗涤盒,振摇洗涤8 min,弃去洗涤液,重复3次；打开蛋白芯片(使上部和中下部脱离),在膜表面加入20 μl已混合的检测液,反应30 s;生物芯片检测仪对蛋白芯片读取数据。使用特定的软件进行数据分析,并打印出检测报告。

　　1.4  统计学分析

　　利用SPSS 11.0 for windows统计分析软件包进行数据分析，以定量血清肿瘤标记物一项指标超过正常值上限为阳性(铁蛋白单独升高不计为阳性)。

　　2  结果

　　2.1  血清肿瘤标志物浓度结果

　　肺癌组与健康对照组和肺部良性疾病组比较,CA125、CA242、CA199、CA153、CEA、FER值差异存在显著性(P<0.05或P<0.01);其他标志物差异无显著性(P>0.05)，见表1。

　　2.2  血清肿瘤标志物阳性率结果

　　健康对照组阳性1例,阳性率2.5%;肺部良性疾病组阳性18例,阳性率36%;肺癌组阳性24例,阳性率80.0%。30例肺癌患者中,CEA、CA125和FER的阳性率为66.6%、63.3%、63.3%,对肺癌诊断的价值较大;其次为CA242,阳性率为40.0%,CA199的阳性率为40.0%,CA153的阳性率为33.3%,而其他各项标志物的阳性率都较低(见表1、表2)。表1  多肿瘤标志物蛋白芯片技术检测血清肿瘤标志物浓度和阳性率肿瘤标志物浓度 (略)注：▲▲为P<0.01,▲为P<0.05。表2  各组血清肿瘤指标的阳性率例(略)

　　3  讨论

    肺癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一,其病死率居男性恶性肿瘤的首位。肺癌的确诊多依据细胞学和组织病理学检查,其特异性较高,但常由于取材不当而致阳性率降低;对早期无症状或X线隐性肺癌患者,若及时检查其血清肿瘤标记物,将有助于肺癌的监测和早期诊断。目前尚未发现肺癌特异性抗原,而不同组织类型的肺癌具有不同的肿瘤标志物,单项肿瘤标志物的检测对肺癌的诊断价值有限,其灵敏度和特异性都不高。因此,提倡多肿瘤标志物联合检测以期提高对肿瘤诊断的灵敏度和特异性。

    血清ＣＥＡ是一种恶性肿瘤相关抗原, 是目前应用最广泛的肿瘤标志物之一, 除胃肠道肿瘤外,在肺癌中其水平也可升高,并应用于实体瘤的检测［1］。在30%～80%肺癌患者血清中其浓度升高,升高程度与癌细胞的多少有直接关系,肺腺癌中犹为显著,并与肿瘤转移和复发相关,对预后有指导意义［2］。ＣＡ125是胚胎发育过程中体腔上皮表达的一种大分子糖蛋白,是一种似黏液蛋白复合物,最初认为是卵巢癌特异性,经深入研究为一种广谱的标志物, CA125升高与肿瘤的发展和预后相关,居高不下常见于癌症晚期,为不祥之兆［3］,其表达水平在肺癌患者和正常人中有显著性差异,其血清含量在肺腺癌中明显升高。本实验的阳性率为63.3%。FER是一个非特异性的指标,在健康人群中分布范围很大,个体差异明显,因此,单独出现阳性时无特殊预警意义,只有结合其他指标才能作出判断,在晚期肺癌患者FER阳性率较高［4］,本实验的阳性率为63.3%。CA242是一种黏性糖蛋白,它对肺腺癌具有较高的敏感性和特异性［5］,本实验的阳性率为40%。ＣＡ19-9胚胎期间胎儿的胰腺、胆囊、肝、肠等组织中存在这种抗原,但正常人体组织中含量甚微。据报道,ＣＡ199为肺癌中表达的糖链抗原,但其敏感性较低［6］。NSE作为肿瘤标志物以肺小细胞癌(SCLC)升高尤为明显,其特异度达到96%,而灵敏度只有6%左右,本实验的阳性率为3.3%,与文献报道相符［7］,它有助于肺癌的分型,但不适合作为肺癌筛查的指标。

    显而易见,单个敏感指标检测对肺癌的检出率在50%左右,而用多肿瘤标志物蛋白芯片系统对肺癌的检出率为80.0%,大幅度改善了对肺癌的诊断灵敏度。因其他指标对肺癌的检出率较低,所以我们认为,CEA、CA125、CA153、ＣＡ19-9和CA242联合检测是筛查肺癌的优化组合。根据抗肿瘤单克隆抗体证实,血清肿瘤标志物均非特异的肿瘤相关抗原,其检测肿瘤的敏感性及特异性均有限［7］。我们认为,多项指标联合检测可以提高诊断的准确性,运用多肿瘤标志物蛋白芯片技术,对肺癌及各类肿瘤的诊断有较高的临床参考价值。【提供服务：生物芯片整体解决方案、兽药残留芯片检测系统；生物芯片扫描仪等仪器；耳聋基因芯片、乙肝病毒耐药检测芯片、抗核抗体检测蛋白质芯片、结核分枝杆菌耐药检测芯片、G+细菌鉴定与耐药检测基因芯片等；食源性致病微生物检测试剂盒、兽药残留芯片检测试剂盒等；HLA基因分型检测方案、血小板基因分型；人类全基因组寡核苷酸微阵列芯片服务、家蚕全基因组寡核苷酸微阵列芯片服务、人肿瘤相关基因寡核苷酸微阵列芯片服务、miRNA微阵列芯片服务、DNA甲基化谱检测寡核苷酸芯片服务等；合作共建研究中心服务、生物芯片实验室建设服务、科研课题研究服务；糖尿病超强化治疗技术应用项目合作。请联系索取详细产品和服务介绍资料：医学与生命科学服务中心暨虫洞（北京）卫生科技有限公司，戴天岩  主任、总经理，手机：13051069337，E-mail:davad311@126.com，msn:davad311@hotmail.com,qq:104974415，虫洞医学与生命科学网http://blog.sina.com.cn/cnyr】

 

　　

 【参考文献】

　　［1］Stoll D,Templin M,Traub PC,et al.Protein microarray technology［J］.Front Biosci,2002,7:1332.

　　［2］沈方臻,梁军.血清肿瘤标志物在肺癌诊断中的价值［J］.齐鲁医学杂志,2003,18(2):118120.

　　［3］刘波,陈健.原发性肺癌几种肿瘤标志物的临床应用价值［J］.四川医学,2001,22(11):10291030.

　［4］Harmci E,Alatas O,Colak O,et al.Diagnostic value of CEA,CA153,CA199,CYFRA21,NSE,and TPA assay in pleuralef fusions［J］.Lung Cancer,2001,31:910.

　　［5］闫彦芳,秦腊梅.五项肿瘤标记物对鉴别诊断肺癌和肺部感染的临床价值［J］.标记免疫分析与临床,2002,9(2):121123.

　　［6］黄慧,于宪.血清肿瘤标志物的联合检测在肺癌诊断中的价值［J］.肿瘤研究与临床,2003,15(2):8990.

　　［7］高辉,林钢,刘桐林,等.血清ＣＹＦＲＡ21-1、ＮＳＥ、ＣＥＡ的测定在肺癌诊断中的意义［J］.中国现代医学杂志,2001,11(11):13.