抽取法：是从动植物中提取，只能处在实验阶段，不适合大规模生产。

　　化学合成法：化学合成法一般以葡萄糖或D-核糖作为起始原料，该生产方法对环境污染严重,产品中含有难以根除的杂质和残留毒性,正是由于这些因素导致目前的核黄素生产方法向生物发酵方向发展。成本高、环保处理困难，已逐步被淘汰。化学合成法由3，4-二甲基苯胺与D-核糖来合成。

　　微生物一步发酵法：微生物一步发酵法采用的原料主要为植物油、葡萄糖、糖蜜和大米等。生物一步发酵法多采用醋酸梭状芽孢杆菌和假丝状酵母等菌种。BASF公司主要采用豆油作为核黄素的生产原料。湖北广济药业公司原先主要以糖蜜作为核黄素生产原料，但是糖蜜的供应却难以保障，因此广济药业公司投资1.8亿开发了以大米代替糖蜜生产核黄素的新工艺，降低了原料成本，而且还扩大了核黄素的生产规模(大米糖化生产线也在2002年元旦正式建成投产)。采用新工艺后工厂成本从40万元/吨下降到20万元/吨。用一步发酵方法仅需一步即可(产品纯度为80%)。自从一步发酵方法被引入核黄素工业生产以来，大幅度降低了生产成本、减少了环境污染，目前已经成为主流的技术。

　　半微生物发酵半化学合成：此方法中和了微生物发酵法和化学合成法，但所添加的化学助剂，残留太高，难分离。不适合大生产。D一核糖是半微生物发酵半化学合成法生产核黄素的重要中间产物。使用半合成半发酵法生产核黄素需要8个工艺步骤(产品纯度为96%).

      广济药业目前是国内惟一一家使用一步发酵法生产核黄素的生产商，生产成本远低于其它使用半发酵/半合成方法的生产商，于是，在使用半合成半发酵技术路线成本过高、核黄素不断降价的竞争压力下，不少生产商逐渐关闭生产线、减产或者转换了生产技术路线。目前，广济药业已经占有了国内约90%的核黄素市场。