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上海2004年高考考到赤霉素对诱导α-淀粉酶的实验，最近好多地方，包括浙江调研卷也考到这方面的题。

（浙江调研卷）某兴趣小组用某品种的大麦种子进行“不同浓度赤霉素对诱导α-淀粉酶合成的影响”的预实验。其基本步骤如下：

①用刀片将大麦种子切成 有胚、无胚两半，消毒后在无菌条件下浸泡48 h。

②按下表在培养瓶中加入相应的试剂和材料，在 30℃下振荡培养12 h。

③取6支试管，编号并各加入1 mL 0.1%淀粉溶液，再从上述培养瓶中各吸取0.2 mL溶液加入对应编号试管并摇匀。将试管置于30℃恒温水浴保温10 min，然后在各试管中立即加入2 mL碘液，振荡后观察颜色变化并记录。

请回答：

    （1）大麦种子去胚的原因是                                      。1号瓶作为对照的目的是                                              。

    （2）步骤②中，30℃下振荡培养12 h的目的是                             。

    （3）步骤③中，若6号瓶蓝色最浅，但不能判定该赤霉素浓度是诱导α-淀粉酶合成的最适 浓度。欲判定其最适浓度，进一步的实验是                           。

    （4）若不用碘液显色方法来判定α-淀粉酶 的活性，还可用检测                的方法来判定。这两种方法的主要差异在于前者测定的是                   ，后者测定的是                              。

答案：（1）排除胚产生的赤霉素对实验的干扰（2分）    证明胚可产生赤霉素（2分）

  （2）赤霉素诱导α-淀粉酶的合成（2分）

  （3）增设高于6号瓶的赤霉素浓度梯度的实验（2分）

  （4）还原糖（2分）    淀粉消耗量（底物消耗量）（2分）还原糖生成量（产物生成量）（2分）

    下面是大学教材中的赤霉素能诱导糊粉层细胞中α-淀粉酶实验材料。

实验原理：淀粉性种子在萌动过程中，胚释放出来的赤霉素能诱导糊粉层细胞中α-淀粉酶基因的表达，引起α-淀粉酶生物合成，并分泌到胚乳中催化淀粉水解为糖。通过碘试法比色测定淀粉在酶催化反应过程中的消耗量，可以定量分析α-淀粉酶的活力。

一、仪器、药品与材料

（一）实验材料

大麦(Hordeum vulgare L.)或小麦(Triticum aestivum L.)等禾本科植物种子。

（二）仪器与用品

    分光光度计，恒温振荡器，水浴锅， 2mL 移液管 1 支， 50mL 烧杯 2 只，试管 6 支，青霉素小瓶 6 个，镊子 1 把，刀片。

（三）试剂

1．1 ％次氯酸钠溶液： 称取1 g次氯酸钠粉末溶解于1000 mL水中。

2．0.1 ％淀粉磷酸盐溶液：取 1 g 淀粉和 8.16 g KH2PO4，用蒸馏水配制成 1000 mL的溶液。

3．以0.1 ％淀粉磷酸盐溶液为母液，分别配制0、1、2、3、4、5、6、7 mg/mL的淀粉溶液。

4．2 × 10^-5 mol/L 赤霉素溶液：称取6.8 mg的GA3 放入烧杯中，加少量 95 ％酒精使其溶解，移入1000 mL容量瓶中，加水定容至刻度，然后再稀释成 2 × 10^-6mol/L、2 × 10^-7 mol/L和2 × 10-8 mol/L 三种浓度的赤霉素溶液。

5．10-3 mol/L 醋酸缓冲液，pH 4.8：缓冲液配制参见附录。每1000 mL 10-3 mol/L 醋酸缓冲液中加入1 g链霉素，使每mL缓冲液中含链霉素1 mg。

6．I₂-KI 溶液：取 0.6 g KI 和 0.06 g I2 溶于1000 mL 0.05 mol/L的HCl 中。

二、实验步骤

1．取样：选取大小一致、健康完好的大麦或小麦种子100 粒，用刀片将每粒种子横切成有胚和无胚的半粒，分装于2个烧杯中备用。

2．表面消毒：向2个烧杯中加入1%次氯酸钠溶液，以浸没种子为度。消毒 15 min后，用无菌水冲洗3次，备用。

3．处理浓度：将6只青霉素小瓶编号后，按表40-1加入溶液和材料。溶液混匀后，1~6号小瓶中赤霉素的最终浓度分别为：0 、2×10^-8、 2 × 10^-7 、 2×10^-6和2×10^-5 mol/L。将青霉素小瓶置于恒温振荡器中于 25 ℃下振荡培养24 h。

4．淀粉酶活力分析：培养完毕后，从每个小瓶中吸取培养液0.1 mL，分别置于事先盛有1.9 mL 0.1%淀粉磷酸盐溶液的试管中，摇匀，在30℃温箱或水浴中精确保温10 min。用滴管各取出1滴反应液滴于白瓷板的6个穴中，滴加1滴I2-KI，观察显色情况，比较各穴中颜色的差异。若用白瓷板显色时差异尚不明显，则延长保温时间，直至白瓷板上有显色差异为止。取出试管各加I2-KI溶液2 mL、蒸馏水5 mL，充分摇匀，于580nm条件下测定吸光度（OD）值，以蒸馏水作空白对照。

表GA3处理浓度及方法

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   5．标准曲线制作：各取不同浓度 (0~7 μg/mL) 淀粉溶液2 mL，按照步骤4过程，各加I₂-KI溶液2 mL、蒸馏水5 mL，充分摇匀，并于580nm处测定OD值（以蒸馏水作空白对照）。

以淀粉浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线，或直接计算直线回归方程。

6．结果计算

根据OD值从标准曲线上查得或使用直线回归方程计算出各处理中淀粉含量。第1瓶为淀粉的原始量（X），第2瓶为带胚半粒种子反应后淀粉的剩余量（Y），第3~ 6瓶为无胚半粒种子加入不同浓度赤霉素溶液反应后淀粉的剩余量 (Y) 。

被水解淀粉的含量 (% )=[(X-Y)/X] × 100

以被水解的淀粉量衡量淀粉酶活性大小，绘制赤霉素浓度与淀粉酶关系曲线，并解释实验结果。

三、思考题

１．实验中为何要用 1 %次氯酸钠溶液处理小麦种子？为何要在醋酸缓冲液中加入链霉素？

２．本实验为何要将小麦种子分成有胚和无胚的半粒？为何1 号和2 号瓶中都没有加入赤霉素溶液，但反应完后两者溶液的吸光值却不同？